内皮抑素基因定点突变体的构建

作者：殷秀丽; 张春梅; 张晶旭; 付安安; 尚巍; 刘平; 葛红岩

来源：国际眼科杂志, 2009, 9(02): 277-279.

• 内皮抑素
• 定点诱变
• 角膜新生血管

目的:内皮抑素是一种内源性的血管生成抑制剂。运用定点突变技术对人内皮抑素基因进行改造,将内皮抑素中的RGAD改为RGD序列。构建野生型和突变型RGD-en-dostatin基因的真核表达载体,为进一步探讨其对角膜新生血管的影响奠定基础。方法:以pMD18-T/endostatin载体为模板扩增野生型内皮抑素基因全长编码序列,克隆至真核表达载体pIRES2-EGFP上,采用快速体外定点诱变技术获得RGD突变体。经PCR,酶切和序列测定方法鉴定重组质粒。结果:PCR成功扩增了野生型和RGD突变型的内皮抑素基因,并成功构建了其真核表达载体。结论:改造的含有RGD结构的内皮抑素基因真核表达质粒的成功构建并鉴定。

• 单位
  哈尔滨医科大学; 第一临床医学院; 大庆市龙南医院