牛传染性鼻气管炎病毒gG iELISA抗体检测方法的建立

作者：张芳; 陈颖钰; 郭爱珍^*

来源：中国兽医学报, 2018, 38(08): 1504-1512.

DOI：10.16303/j.cnki.1005-4545.2018.08.08

• 牛传染性鼻气管炎
• 牛疱疹病毒1型
• gG蛋白
• iELISA
• 鉴别诊断

为了建立有效鉴别牛传染性鼻气管炎病毒(BoHV-1)gg-/tk-基因缺失疫苗人工免疫和BoHV-1野毒株自然感染的鉴别诊断方法,以BoHV-1gG蛋白为抗原建立了间接ELISA(iELISA)抗体检测方法。根据编码BoHV-1gG蛋白的基因序列设计特异性扩增引物,以BoHV-1基因组DNA为模板扩增gg基因截短片段,克隆至原核表达载体pGEX-6p-1并进行IPTG诱导表达。SDS-PAGE和Western blot分析表明,gg基因在大肠杆菌BL21(DE3)中呈可溶性及包涵体2种形式表达,纯化的gG蛋白具有良好的反应原性。将可溶性gG蛋白纯化后作为包被抗原,建立了BoHV-1gG iELISA抗体检测方法,并优化了各反应条件。使用该方法与商业化试剂盒BoHV-1gE和gB阻断ELISA进行比较检测,并与其他5种牛常见病原体的阳性血清进行交叉反应检测,同时进行了该方法的重复性试验、保存期试验及消长规律试验;最后使用该方法对临床1 031份牛血清进行了检测,血清流行率为83.71%(95%CI:81.30%85.90%)。结果显示,该方法的阴、阳性血清检测的临界值(S/P值)为0.398,与进口试剂盒比较显示该方法具有良好的诊断敏感性和特异性,且本试剂盒可在1∶50倍样本稀释下进行检测,而商业化试剂盒是1∶1倍样本稀释检测。此外,该方法分析特异性良好,与其他非相关病原体的阳性血清无交叉反应;检测重复性良好;在4℃条件下可保存6个月。该方法在人工感染BoHV-1野毒株和人工免疫BoHV-1 gg-/tk-疫苗株20d后可以明显区分疫苗株免疫和野毒株感染。综上所述,本研究成功建立了BoHV-1gG iELISA抗体检测方法,敏感性和特异性良好,既可以用于有效鉴别疫苗免疫和自然感染,也可作为BoHV-1的血清学诊断方法。

• 单位
  农业微生物学国家重点实验室; 农业部; 华中农业大学