低氧预处理人牙髓干细胞移植对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑白质损伤的影响

作者：武沐洋; 王晓莉; 高淑君; 张浩; 肖培伦; 王凡涛^*

来源：中国现代医学杂志, 2023, 33(12): 24-32.

• 低氧预处理
• 人牙髓干细胞
• 缺氧缺血性脑损伤
• 脑白质损伤
• 新生大鼠

目的 探讨低氧预处理人牙髓干细胞移植（H-hDPSCs）对缺氧缺血性脑损伤（HIBD）新生大鼠脑白质损伤及内源性神经干细胞的影响。方法 将健康7 d龄Sprague-Dawley新生大鼠随机分为假手术组、HIBD组、常氧培养hDPSC移植组（N-hDPSCs组）及低氧预处理hDPSC移植组（H-hDPSCs组），每组11只。采用经典的Rice-Vannucci法复制HIBD模型。模型复制后7 d采用增殖细胞核抗原（PCNA）/巢蛋白（Nestin）免疫荧光双标法检测大鼠侧脑室室管膜下区内源性神经干细胞（NSCs）的增殖；模型复制后3周，滑竿实验、Y迷宫实验及模型复制后4周Morris水迷宫实验检测大鼠的运动及空间记忆能力；行为学实验后采用神经元特异性核蛋白（NeuN）免疫荧光法检测大鼠脑组织皮层和海马CA1区神经元的表达；采用髓鞘碱性蛋白（MBP）及神经纤维丝蛋白重链（NF200）免疫荧光双标法检测纹状体及胼胝体区髓鞘及神经纤维的表达。结果 HIBD组模型复制后7 d的侧脑室室管膜下区增殖NSCs数较假手术组少（P <0.05）,N-hDPSCs组、H-hDPSCs组较HIBD组多，但较假手术组少（P <0.05）,N-hDPSCs组较H-hDPSCs组少（P <0.05）。N-hDPSCs组、H-hDPSCs组模型复制后3周爬杆时间较假手术组长（P <0.05），但较HIBD组短（P <0.05）,H-hDPSCs组较N-hDPSCs组短（P <0.05）。HIBD组新异臂停留时间较假手术组短（P <0.05）,N-hDPSCs组、H-hDPSCs组较HIBD组长（P <0.05），但较假手术组短（P <0.05），而N-hDPSCs组较H-hDPSCs组短（P <0.05）。各组大鼠第1天、第2天、第3天、第4天逃避潜伏期比较，经重复测量设计的方差分析，结果：(1)不同时间点逃避潜伏期有差异（F=662.825,P=0.000）；(2)各组逃避潜伏期有差异（F=109.286,P=0.000）,N-hDPSCs组、H-hDPSCs组大鼠较假手术组长（P <0.05），但均较HIBD组短（P <0.05）,H-hDPSCs组较N-hDPSCs组短（P <0.05）；(3)各组逃避潜伏期变化趋势有差异（F=20.543,P=0.000）。N-hDPSCs组、H-hDPSCs组大鼠在第5天的空间探索实验中穿台次数较假手术组少（P <0.05），但较HIBD组多（P <0.05）,H-hDPSCs组较N-hDPSCs组多（P <0.05）。N-hDPSCs组、H-hDPSCs组大鼠在目标象逗留时间百分比较假手术组小（P <0.05），但较HIBD组多（P <0.05）,H-hDPSCs组较N-hDPSCs组多（P <0.05）。NhDPSCs组、H-hDPSCs组NeuN阳性细胞数较HIBD组多（P <0.05），但较假手术组少（P <0.05）,N-hDPSCs组较H-hDPSCs组少（P <0.05）。N-hDPSCs组、H-hDPSCs组纹状体、胼胝体区MBP、NF200蛋白平均荧光强度高于HIBD组（P <0.05），但低于假手术组（P <0.05）,H-hDPSCs组高于N-hDPSCs组（P <0.05）。结论 HhDPSCs与N-hDPSCs移植可有效改善HIBD新生大鼠远期行为学，并促进HIBD新生大鼠内源性NSCs的增殖，减轻脑白质损伤进而促进HIBD神经修复，且H-hDPSCs移植的疗效优于N-hDPSCs。

• 单位
  潍坊医学院附属医院; 潍坊医学院; 基础医学院