结核杆菌含信号肽的Mtb8.4真核表达质粒的构建及在COS-7细胞中的表达

作者：李晖; 李榕; 钟森; 任红

来源：现代预防医学, 2005, (07): 711-713+750.

• 结核杆菌
• MS
• PCR
• 基因克隆
• 真核表达

目的:克隆结核杆菌含信号肽的Mtb8·4(MS)基因,导入真核表达载体pcDNA3·1(+),构建成重组质粒pcDNA3·1(+)-MS,并在真核细胞中进行表达。方法:提取人结核杆菌H37Rv株的基因组作为模板,进行PCR圹增,获得含信号肽的Mtb8·4(MS)基因后,与pcDNA3·1(+)载体进行连接重组,用限制性内切酶消化、PCR及DNA序列分析等多种方法进行鉴定;重组质粒转染COS-7细胞48h后,用RT-PCR方法鉴定MS在转录水平的表达情况。结果:pcD-NA3·1(+)-MS真核表达载体构建成功;转染COS-7细胞后,MS在转录水平成功表达。结论:pcDNA3·1(+)-MS真核表达质粒的构建以及MS在COS-7细胞中的成功表达,为进一步研究该真核表达质粒的免疫保护效果及制备结核病pcD-NA3·1(+)-MSDNA疫苗奠定了基础。

• 单位
  泸州医学院附属医院; 重庆医科大学; 江西省南昌市血站