PNPase调控线粒体microRNA对线粒体DNA的保护作用

作者：李力力; 游扬; 周源; 凌贤龙

来源：第三军医大学学报, 2014, 36(08): 780-784.

DOI：10.16016/j.1000-5404.2014.08.002

• PNPase
• 线粒体
• MitomiRs
• 氧化损伤

目的探讨抑制PNPase表达对线粒体microRNA(MitomiRs)表达的影响以及对线粒体DNA的保护作用。方法以人肝癌细胞SK-Hep1、HepG2和人骨肉瘤细胞U2OS为研究对象,用带绿色荧光蛋白的(green fluorescent protein,GFP)PNPase shRNA慢病毒转染细胞,采用Western blot方法检测PNPase表达。分离细胞线粒体、提取线粒体RNA、microRNA芯片检测下调PNPase前后线粒体microRNA(MitomiRs)种类的变化;Q-PCR检测mtDNA损伤频率、ELISA方法检测线粒体8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)。结果激光共聚焦显微镜观察显示,SK-Hep1、HepG2和U2OS细胞转染空载体病毒及PNPase shRNA慢病毒转染后1224 h可见明显的绿色荧光。当MOI(转染复数)=20时,3种细胞的慢病毒转染效率达80%以上。连续观察2周,转染效率仍维持在70%80%。Western blot检测结果显示PNPase shRNA组细胞PNPase蛋白表达低于正常对照组及阴性对照组。microRNA芯片显示:PNPase shRNA后目的细胞MitomiRs表达谱发生明显变化,miR-30c-2-3p、miR-494、miR-1273g-3p、miR-4443表达上调,而miR-324-3p、miR-574-5p、miR-371b-5p、miR-6068、miR-21-5p表达下调。Q-PCR检测显示PNPase shRNA组细胞mtDNA损伤频率减少。ELISA结果显示PNPase shRNA组线粒体8-OHdG含量下降。结论抑制肿瘤细胞线粒体PNPase表达可导致MitomiRs表达谱发生变化,同时,肿瘤细胞mtDNA损伤减少,提示MitomiRs可能参与了mtDNA复制的调控。

• 单位
  第三军医大学新桥医院