他莫昔芬抑制G蛋白偶联雌激素受体沉默的乳腺癌相关成纤维细胞的增殖并促进其凋亡

作者：严玉钊; 余腾骅; 涂刚; 柳满然; 袁杰; 杨光伦

来源：细胞与分子免疫学杂志, 2015, 31(09): 1189-1199.

DOI：10.13423/j.cnki.cjcmi.007450

• G蛋白偶联雌激素受体(GPER)
• 慢病毒
• 乳腺癌相关成纤维细胞
• 他莫昔芬

目的通过构建G蛋白偶联雌激素受体(GPER)的慢病毒短发夹RNA(shRNA)表达载体,感染人乳腺癌相关成纤维细胞(BCAF)后,探讨他莫昔芬对BCAF增殖及凋亡的影响。方法构建GPER-RNAi慢病毒载体及对照病毒载体后,进行病毒包装,实时定量PCR检测GPER mRNA水平,Western blot法检测GPER蛋白水平;将BCAF分为4个组,包括阴性对照组、GPER-RNAi组、阴性对照联合10-8mmol/L他莫昔芬组和GPER-RNAi联合10-8mmol/L他莫昔芬组,CCK-8法检测他莫昔芬处理后细胞增殖,异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶(annexinⅤ-FITC/PI)双染色结合流式细胞术检测他莫昔芬处理后的细胞凋亡情况。结果 Western blot结果显示感染慢病毒的BCAF中,GPER表达显著降低。与阴性对照相比,CCK-8法检测结果显示他莫昔芬显著促进BCAF增殖。GPER敲低的BCAF,他莫昔芬的促增殖作用减弱;流式细胞术检测结果显示,他莫昔芬抑制BCAF凋亡,但在GPER敲低的BCAF,他莫昔芬的抑制细胞凋亡作用减弱。结论 Lenti-GPER-shRNA慢病毒感染BCAF,可有效沉默GPER表达;GPER敲低的BCAF,他莫昔芬刺激细胞增殖和抑制凋亡作用减弱。

• 单位
  重庆医科大学附属第一医院; 重庆医科大学