猪肺炎支原体部分血清体液免疫显性蛋白抗原的筛选鉴定

作者：钟杰; 蔡宜冰; 周瑶琴; 徐作波; 吴建云; 丁红雷^*

来源：中国兽医学报, 2019, 39(05): 894-900.

DOI：10.16303/j.cnki.1005-4545.2019.05.15

• 猪肺炎支原体
• 血清体液免疫显性蛋白抗原
• 原核表达
• ELISA

旨在筛选猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)部分血清体液免疫显性蛋白抗原。利用生物信息学软件筛选到7个普遍存在于Mhp菌株中的蛋白Mhp104、Mhp299、Mhp367、Mhp462、Mhp465、Mhp477、Mhp488。将其对应的基因分别连接pGEX-6P-1载体后转化至大肠杆菌BL21(DE3),诱导表达目的蛋白。将诱导表达目的蛋白的7个重组菌裂解液和GST工程菌裂解液分别加入谷胱甘肽板进行抗原包被,以PBS+10%FBS+2.5%脱脂奶粉为封闭液,血清和酶标二抗分别按照1∶500,1∶40 000稀释,将抗原包被板分别与11份Mhp恢复期血清和7份Mhp阴性血清进行ELISA反应。结果表明,所有7个重组融合蛋白均能以可溶形式表达,且GST-Mhp299、GST-Mhp367、GST-Mhp488能被PreScission Protease酶切。最终共筛选出5个Mhp血清体液免疫显性蛋白抗原,分别为Mhp104、Mhp367、Mhp462、Mhp477、Mhp488,从而为Mhp基因工程亚单位疫苗的研发提供了抗原靶标。

• 单位
  西南大学