PTEN基因过表达抑制血管平滑肌细胞增殖的研究

作者：邢晓倩; 胡亚文; 胡晓蔚; 方五旺

来源：临床心血管病杂志, 2015, 31(04): 455-459.

DOI：10.13201/j.issn.1001-1439.2015.04.029

• 再狭窄
• 血管平滑肌细胞
• 转染
• 第10号染色体丢失的磷酸酶基因
• 增殖

目的:初步研究第10号染色体丢失的磷酸酶(PTEN)基因的过表达对血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖和凋亡的影响,为冠状动脉支架内再狭窄的治疗提供新思路。方法:培养大鼠胸主动脉VSMCs,通过双酶切将目的基因克隆至带有强绿色荧光蛋白(EGFP)为报告基因的质粒中,构建重组质粒。再将细胞分为3组:转染pEGFP-PTEN质粒组、转染空载体pEGFP组、正常对照组。荧光显微镜观察转染效果。通过细胞计数法及四唑盐(MTT)比色实验检测各组VSMCs的增殖。RT-PCR检测各组细胞PTENmRNA的表达。流式细胞仪测定各组细胞的凋亡。结果:1经PCR和测序鉴定表明,携目的基因PTEN的重组穿梭质粒pEGFP-PTEN构建正确。2荧光显微镜下可见转染阳性细胞发绿色荧光,表明质粒成功转染VSMCs。3通过细胞计数、MTT法检测显示,PTEN基因抑制VSMCs生长。空载体组和对照组之间未见明显差异。5RT-PCR同时扩增pEGFP-PTEN转染组、pEGFP转染组和对照组PTENmRNA,结果显示pEGFP-PTEN转染组PTENmRNA的表达比pEGFP转染组及对照组PTENmRNA的表达显著增加(P<0.05)。6流式细胞仪检测显示转染pEGFP-PTEN基因的VSMCs凋亡率约为25.10%,显著高于对照组。结论:pEGFP-PTEN成功转染体外培养的VSMCs后,PTEN在mRNA水平表达增加。通过VSMCs内PTEN过度表达能够抑制其增殖,促进其凋亡。

• 单位
  皖南医学院; 芜湖市第二人民医院