上调环状RNA8199表达对食管鳞状细胞癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响

作者：王伟; 燕迪迪; 丁爽; 倪凯园; 姜国忠^*

来源：郑州大学学报(医学版), 2021, 56(03): 380-385.

DOI：10.13705/j.issn.1671-6825.2020.05.084

• 环状RNA8199
• 食管鳞状细胞癌
• 增殖
• 迁移
• 侵袭

目的:探讨上调环状RNA8199表达对食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法:RT-PCR检测ESCC细胞系KYSE520中环状RNA8199的表达;Sanger测序对环状RNA8199反向剪接位点的PCR产物进行验证;将KYSE520细胞中提取的RNA分为RNase R处理组与对照组,RNase R处理组用20 U RNase R处理,对照组用等量双蒸水替代,qRT-PCR法分别检测两组环状RNA8199和ATXN10 mRNA的表达情况;采用细胞免疫荧光法和核浆分离法观察环状RNA8199在ESCC细胞系KYSE520和KYSE270中的亚定位;将高表达环状RNA8199的质粒载体(环状RNA8199-OE)或阴性对照(环状RNA8199-NC)分别转染到KYSE30和KYSE70细胞中,采用CCK-8和平板克隆形成实验测定细胞增殖能力,Transwell实验测定细胞迁移和侵袭能力。结果:RT-PCR实验证明环状RNA8199通过发散引物只能扩增出细胞的反转录产物cDNA,而线性转录本通过聚合引物能同时扩增出cDNA和基因组DNA;Sanger测序证实环状RNA8199反向剪接位点;RNase R处理后环状RNA8199的表达水平与对照组相比无改变(P=0.184),而ATXN10 mRNA的表达水平与对照组相比下降(P=0.003);细胞免疫荧光显示环状RNA8199主要定位于细胞浆中,核浆分离实验显示环状RNA8199在细胞浆水平高于细胞核水平(P<0.001);与环状RNA8199-NC组相比,环状RNA8199-OE组ESCC细胞OD值、克隆形成数、迁移细胞数和侵袭细胞数均下降(P<0.05)。结论:环状RNA8199在ESCC细胞中表达,主要定位于细胞浆中且高度稳定。上调环状RNA8199表达可抑制ESCC细胞增殖、迁移和侵袭能力。

• 单位
  郑州大学第一附属医院