运用CRISPR/Cas9技术构建表达10rolGLP-1的降糖酵母

作者：张金睿; **明; 孟钰杰; 邢曙光; 刘奇奇; 李明刚^*

来源：生物工程学报, 2023, 39(09): 3747-3756.

DOI：10.13345/j.cjb.220870

• CRISPR/Cas9
• 胰高血糖素样肽-1 (GLP-1)
• 酿酒酵母
• 2型糖尿病
• 生物药物

为研发一种用于治疗2型糖尿病的新型生物药物，本研究运用实验室前期构建的10rolglp-1基因和CRISPR/Cas9基因组编辑技术创建了重组酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)工程菌株。构建了向导RNA(guideRNA,gRNA)表达载体pyES2-gRNA、供体载体pNK1-L-PGK-10rolGLP-1-R和Cas9表达载体pGADT7-Cas9，将这些表达载体共转化酿酒酵母INVSc1菌株，通过同源重组途径敲入PGK-10rolGLP-1表达单元，最终得到具有降血糖功能、高表达10rolGLP-1的酿酒酵母。通过SDS-PAGE和蛋白质印迹，筛选出2种稳定表达10rolGLP-1的酿酒酵母重组菌株。降血糖实验结果表明，重组降血糖酿酒酵母对糖尿病小鼠模型具有显著的降血糖作用，其血糖下降平缓，可避免引起低血糖风险。体重变化和多尿等其他症状也明显改善，表明本研究构建的口服降血糖酿酒酵母有望成为一种简单有效、经济实用的糖尿病生物药物。

• 单位
  药物化学生物学国家重点实验室