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摘要
目的探讨WAS-like蛋白(WASL)在肠癌的表达情况,以及对肠癌细胞干性的影响。方法运用UALCAN数据库预测WASL蛋白的表达量与肠癌组织中的表达及其与肠癌患者的性别、临床分期、淋巴结转移的关系;组织免疫荧光和细胞免疫荧光染色验证WASL在肠癌组织和细胞中的表达。Western blotting检测人正常结直肠黏膜细胞(FHC细胞)与肠癌细胞HCT-116和SW-480中WASL蛋白的表达情况及WASL的转染效率;应用干细胞球(sphere)形成实验和集落形成实验检测转染后,WASL对肠癌细胞中癌干细胞(CSCs)的影响;Real-time PCR检测CSCs相关基因八聚体结合转录因子4(OCT4),性别决定区Y框蛋白2(SOX2),Lin28,Krüppel样因子(KLF)的表达;采用缺氧,血清剥夺和对5-氟尿嘧啶(5-FU)耐药实验检测WASL对肠癌细胞干性的影响。结果 WASL在肠癌组织中mRNA和蛋白均低表达(P<0.05);WASL在肠癌组织中低表达,在HCT-116和SW-480中,WASL的表达明显弱于FHC细胞;成功构建稳定WASL表达的肠癌细胞系;Real-time PCR显示,WASL抑制了CDCs相关基因OCT4,SOX2,Lin28,Krüppel样因子(KLF)的表达;干细胞球形成和集落形成实验发现,WASL抑制肠癌细胞形成干细胞球形成和集落形成;缺氧实验和血清剥夺实验发现WASL上调后,能够抑制肠癌对缺氧和缺血清耐受,5-FU耐药实验显示,WASL也能抑制肠癌细胞对5-FU的耐受。结论 WASL蛋白在肠癌组织和肠癌细胞中低表达,并与肠癌的不良预后有关,WASL蛋白的过表达能够抑制肠癌细胞的干性。
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单位生命科学研究院; 锦州医科大学; 锦州市中心医院
