人釉原蛋白在不同pH值下体外自组装及矿化能力的研究

作者：钟秀; 田鲲^*

来源：实用医院临床杂志, 2023, 20(05): 36-41.

• 釉原蛋白
• 蛋白自组装
• 体外矿化
• pH值

目的 探究人釉原蛋白(AM)在不同pH值下体外自组装能力以及诱导羟基磷灰石(HA)晶体矿化的能力。方法 体外重组、纯化人AM,配制200μg/ml不同pH值(pH=5、6、7、8、9)的AM溶液。分别取出20μl蛋白溶液滴到碳支持膜正面，室温下分别孵育5 min、30 min,透射电镜观察其自组装情况。根据AM在不同pH值下的自组装结果，设置实验pH梯度为：pH=6.4、7.4、8.4、9.4、10.4,配制200μg/ml以上pH值的AM溶液。分别取出10μl蛋白溶液涂布于细胞爬片表面，室温孵育30 min后转移至2 ml现配的人工唾液中37℃培养，4天后取出并进行扫描电镜、X射线衍射分析，观察矿化产物的表征。结果 AM在酸性条件下无明显聚集趋势，无纳米球生成，在中性、碱性条件下均有典型纳米球结构生成。pH=7时，AM聚集趋势变明显，直至pH=8时出现典型的自组装过程，但是在这区间自组装行为变化的临界点并不清晰。在pH=7.4时，AM在37℃和人工唾液营造的无机离子溶液环境中能够诱导出与牙釉质纳米到微米级结构十分类似的HA晶体。结论 AM的自组装过程和矿化能力对pH值非常敏感，在pH=7～8开始出现典型的多级自组装行为，在pH=7.4时可以成功诱导出与天然牙釉质相似的HA晶体。

• 单位
  四川省医学科学院（四川省人民医院）; 西南医科大学; 西藏自治区人民政府驻成都办事处医院; 四川省医学科学院·四川省人民医院; 四川省医学科学院(四川省人民医院)