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摘要
目的研究Notch的配体Dlk1和Jagged1分别激活Notch信号通路后对大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)转分化及增殖的影响。方法在细胞培养体系中,分别加入重组蛋白Dlk1和重组人核转录因子-κB(rhNF-κB)(Jagged1激活剂),正常组加入含120 mL/L胎牛血清的DMEM培养基作为对照,光镜和电镜下观察48、72、96 h时间点AECⅡ增殖和转分化状况。血细胞计数器计数细胞;四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞增殖能力;免疫荧光双标法检测AECⅡ特异性肺泡表面活性蛋白C(SP-C)及肺泡Ⅰ型上皮细胞(AECⅠ)特异性水通道蛋白5(AQP5)的表达;时实荧光定量PCR检测转分化前后各时间点Notch配体Dlk1和Jagged1、通路活化标志Notch1、靶基因Hes1及转分化标志物SP-C、AQP5 mRNA的表达变化。结果细胞数及增殖能力:与正常组比较,Dlk1组细胞数及增殖能力明显提高[细胞数(×109/L)9.05±0.45比7.95±0.65,11.68±0.43比8.68±0.52,11.55±0.17比8.73±0.48,P均<0.05;MTT结果(A值)0.699±0.050比0.462±0.080,0.912±0.080比0.535±0.040,0.726±0.050比0.540±0.020,P均<0.05],转分化速度减慢;rhNF-κB组细胞数及增殖能力降低[细胞数(×109/L)4.95±0.33比7.95±0.65,4.73±0.71比8.68±0.52,4.04±0.11比8.73±0.48,P均<0.05;细胞增殖能力0.398±0.030比0.462±0.080,0.402±0.070比0.535±0.040,0.380±0.110比0.540±0.020,P均<0.05],转分化速度加快;单因素方差分析3组细胞之间的差别有统计学意义(细胞数:F=486.73,P=0.02;细胞增殖能力:F=37.16,P=0.02)。mRNA表达:与正常组比较,Dlk1组SP-C mRNA表达明显增多(P<0.05),AQP5 mRNA表达延迟且明显减少(P<0.05),Jagged1 mRNA始终呈弱表达或不表达,Dlk1、Notch1 mRNA表达增多(P<0.05),Hes1 mRNA表达减少(P<0.05);rhNF-κB组SP-C mRNA表达明显降低(P<0.05),AQP5 mRNA表达提前,且增多(P<0.05),Dlk1 mRNA弱表达或不表达,Jagged1、Hes1、Notch1 mRNA表达增强(P<0.05)。单因素方差分析3组细胞之间SP-C、AQP5、Dlk1、Jagged1、Hes1、Notch1 mRNA的表达差异统计学意义(F=96.80,P=0.01;F=82.55,P=0.01;F=269.80,P=0.00;F=312.34,P=0.00;F=169.17,P=0.01;F=19.85,P=0.02)。结论不同配体激活Notch信号通路后,对AECⅡ转分化和增殖有不同影响,Dlk1能促进增殖,抑制转分化,而Jagged1则抑制增殖,促进转分化。
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