肺炎链球菌热休克蛋白ClpE多克隆抗体的制备及其亚细胞定位

作者：蔡莺莺; 闫文娟; 张群; 王虹; 胥文春; 何於娟; 尹一兵; 张雪梅

来源：中国生物制品学杂志, 2014, 27(01): 28-32.

DOI：10.13200/j.cnki.cjb.000054

• 肺炎链球菌
• 热休克蛋白
• ClpE
• 亚细胞定位

目的制备肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,S.pn)热休克蛋白(heat shock protein,HSP)ClpE多克隆抗体,并确定ClpE在S.pn表面的亚细胞定位。方法应用PCR法从S.pn D39中扩增clpE基因全长片段,克隆入原核表达载体pET28a,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,经亲和层析纯化重组蛋白。用纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗体,间接ELISA法测定抗体效价,Western blot法鉴定抗体的特异性。ELISA法分析ClpE在S.pn表面的亚细胞定位。结果重组表达质粒经PCR、双酶切和测序证实构建正确;表达的重组ClpE蛋白相对分子质量约83 000,表达量约占全菌总蛋白的60%,主要以可溶性上清形式存在;纯化的重组蛋白纯度达90%;制备的ClpE多克隆抗体效价达1∶4 096 000,可与S.pn D39全菌发生特异性反应,S.pn D39在正常生长时可表达ClpE蛋白;ClpE在S.pn表面有表达。结论成功制备了高效价和特异性的ClpE多克隆抗体,ClpE在S.pn表面可正常表达,为表面蛋白。

• 单位
  重庆医科大学; 重庆医科大学附属儿童医院