齐口裂腹鱼PGC-1α超表达及干扰慢病毒载体构建

作者：池永东; 陈智慧; 邱翔; 钟红梅; 陈官璐; 林亚秋^*

来源：水产科学, 2018, 37(06): 781-786.

DOI：10.16378/j.cnki.1003-1111.2018.06.010

• 齐口裂腹鱼
• 成肌细胞
• PGC-1α
• 慢病毒
• 载体构建

利用基因重组方法构建齐口裂腹鱼PGC-1α超表达和干扰慢病毒载体,为最终阐明PGC-1α调控齐口裂腹鱼肌纤维类型转化的分子机理提供重要基础。根据GenBank上登录的齐口裂腹鱼PGC-1α基因序列(GenBank登录号为JN195738)设计引物,经过PCR扩增、双酶切、连接来构建PGC-1α超表达和干扰的慢病毒核心质粒,然后将其与穿梭质粒及包装质粒共同转染293T细胞包装成病毒颗粒,感染体外培养的C2C12成肌细胞,利用实时荧光定量PCR(qPCR)检测PGC-1α在被超表达和干扰表达慢病毒载体感染C2C12成肌细胞72h后的表达水平,确定其超表达及干扰效果。重组质粒FUGWPGC-1α-RFP及PsicoR-PGC-1α-GFP测序验证成功,包装后感染C2C12成肌细胞经qPCR检测后结果显示,超表达组PGC-1α基因表达水平极显著高于对照组(P<0.01),而转染shRNA1组及shRNA2组的PGC-1α基因表达水平极显著低于对照组(P<0.01),证明该基因被成功超表达和干扰。成功构建齐口裂腹鱼PGC-1α超表达及干扰慢病毒载体,为进一步研究该基因在成肌细胞分化中的作用提供重要的基础数据。

• 单位
  西南民族大学