血管紧张素(1-7)激活自噬调控口腔黏膜下纤维性变细胞凋亡与血管生成的研究

作者：邱乐宏; 邓伟^*; 甘成文; 孙莹

来源：安徽医科大学学报, 2023, 58(03): 457-464.

DOI：10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2023.03.018

• 口腔黏膜下纤维性变
• 成纤维细胞
• 血管紧张素(1-7)
• 凋亡
• 自噬
• 血管生成

目的 体外观察血管紧张素(1-7)[Ang(1-7)]对口腔黏膜下纤维性变(OSF)成纤维细胞凋亡与血管生成的影响，并初步探究作用机制。方法 从人颊黏膜组织分离培养成纤维细胞，倒置显微镜观察细胞形态，免疫荧光染色检测波形蛋白(Vimentin)表达；以槟榔提取液(ANE)诱导人成纤维细胞模拟OSF内成纤维细胞体外模型，实验分组包括对照组(正常培养的细胞)、ANE组[100μg/ml ANE培养细胞48 h、ANE+低剂量Ang(1-7)组(100μg/ml ANE+10-7 mol/L Ang(1-7)培养细胞48 h]、ANE+高剂量Ang(1-7)组[100μg/ml ANE+10-5 mol/L Ang(1-7)培养细胞48 h],免疫荧光染色检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达，ELISA法检测细胞培养上清液中Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)和Ⅲ型胶原(CollagenⅢ)的含量，MTT法检测细胞增殖活性，流式细胞术检测细胞凋亡，小管形成实验检测人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的血管形成情况，将mRFP-GFP-LC3病毒转染至细胞后通过免疫荧光染色检测细胞自噬水平，Western blot检测自噬相关蛋白Beclin-1表达及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值。结果 分离培养的细胞呈长梭形，Vimentin呈阳性表达，说明成功分离到成纤维细胞；与ANE组比较，ANE+低剂量Ang(1-7)组和ANE+高剂量Ang(1-7)组的细胞内α-SMA蛋白荧光表达明显减弱，培养上清液中CollagenⅠ和CollagenⅢ的含量减少(P<0.05),细胞增殖活性降低(P<0.05),细胞凋亡率则升高(P<0.05),两组的细胞培养上清液均抑制了HUVEC的血管形成(P<0.05),细胞内自噬小体减少(P<0.05),Beclin-1蛋白表达降低(P<0.05),LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值下调(P<0.05);此外，ANE+高剂量Ang(1-7)组作用效果均强于ANE+低剂量Ang(1-7)组作用效果(P<0.05)。结论 Ang(1-7)能够抑制ANE诱导下成纤维细胞的活化，促进细胞凋亡，并降低HUVEC的血管形成。该机制可能与调控细胞自噬水平有关。

• 单位
  海南省人民医院; 海南医学院