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摘要
旨在克隆山羊SERBP1基因，揭示干扰SERBP1基因后对山羊鼻甲骨原代细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡的作用，为进一步研究羊口疮病毒诱导细胞凋亡的分子机制奠定基础。本研究以简州大耳羊为试验动物，利用RT-PCR技术克隆SERBP1基因cDNA序列并进行生物信息学分析；实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测SERBP1基因在不同组织的表达水平；并筛选有效干扰序列；MTT法检测siRNA干扰SERBP1对山羊鼻甲骨原代细胞增殖的影响，流式细胞仪检测siRNA干扰SERBP1对细胞周期和凋亡的影响，RT-qPCR检测对凋亡相关基因P53、Caspase7、Caspase3等的影响。成功扩增山羊SERBP1基因1 293 bp,包含5′UTR 44 bp, CDS区1 179 bp, 3′UTR 70 bp,编码392个氨基酸残基，不存在信号肽，主要定位于细胞核；预测到SERBP1可能与RPL31、RPS3等10个蛋白存在相互作用。SERBP1基因在山羊胰腺中表达水平最高；筛选到干扰效率为70%的有效干扰序列；siRNA干扰SERBP1基因后抑制了山羊鼻甲骨原代细胞增殖和凋亡，且细胞被阻滞于G0/G1期；同时可下调Caspase3、Caspase7、BCL2L11和Bax基因mRNA的表达，而对Bcl-2、P53、PARP1基因mRNA的表达无显著影响。干扰山羊SERBP1基因抑制了山羊鼻甲骨原代细胞增殖和凋亡，并诱导细胞周期停滞。研究结果为进一步深入研究SERBP1基因功能，揭示ORFV125抑制细胞凋亡的分子机制提供重要的试验数据。
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