IBDV血清Ⅱ型VP5蛋白原核表达及型特异性单克隆抗体的制备

作者：秦立廷; 祁小乐; 高宏雷; 高玉龙; 王笑梅

来源：中国预防兽医学报, 2009, (04): 292-296.

• 传染性法氏囊病病毒
• VP5
• 原核表达
• 单克隆抗体 infectious bursal disease virus
• viral protein 5
• prokaryotic expression
• monoclonal antibody

本实验构建表达了传染性法氏囊病病毒(IBDV)血清Ⅱ型23/82株VP5蛋白,并制备出能够区分不同血清型IBDV的单克隆抗体(mAb)。利用EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切pUC57-23/82VP5质粒,获得23/82株IBDVVP5基因片段,连接到同样处理的原核表达质粒pET-28a,经酶切鉴定获得重组质粒pET-23/82VP5,转化到宿主菌BL21(DE3),在IPTG诱导下表达融合蛋白,SDS-PAGE分析表明该融合蛋白分子量大小约为23ku。Ni-NTA柱纯化重组蛋白,复性后免疫8周龄BALB/c小鼠,3次免疫后,常规方法进行细胞融合,获得1株阳性杂交瘤细胞株(5D3),IFA和west...

• 单位
  兽医生物技术国家重点实验室; 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所