基于膜电位检测原理的γ-氨基丁酸A型受体药物高通量筛选模型

作者：张毅; 石童; 张瑞华; 陈学军; 靳倩; 石晶晶; 王陈^*; 李丽琴^*

来源：中国药理学与毒理学杂志, 2022, 36(02): 120-128.

• 高通量筛选
• γ-氨基丁酸A型受体
• 地西泮
• 膜电位
• 细胞模型

目的 利用膜电位检测原理，构建一种靶向 γ-氨基丁酸 A型受体(GABAAR)的药物高通量筛选模型。方法 采用 α1β2γ2L-GABAAR-CHO 细胞株构建 GABAAR 药物高通量筛选方法；分别以工具化合物的50% 激动效应浓度(EC50)和 EC80浓度下的激活值(ASV)和 Z′因子作为判定指标，对缓冲液反应体系、激动剂 GABA 激活浓度、染料种类和染料孵育时间进行优化选择；在优化条件下分别利用激动剂 GABA(0.05,0.25 和 1.00 μmol·L-1)、阳性变构剂地西泮(Dia,1,5 和 30 μmol·L-1)和拮抗剂加巴嗪(gabazine,Gab,0.1,1.0 和 10.0 μmol·L-1)进行方法稳定性考察；通过工具化合物 GABA,Dia 和 Gab 的剂量-效应关系检测，考察方法灵敏度。结果 构建的方法分别实现了对不同药理性质化合物GABA,Dia 和 Gab 的特异性检测；通过方法优化获得的优化条件为：在 GABA EC20～EC50激活浓度下，采用 5 μL 含氯体系加样，对使用红色染料孵育30～50 min的GABAAR-CHO细胞进行工具化合物检测；对不同浓度GABA,Dia 和 Gab 检测的 CV%分别介于 4.09%～15.30%,5.59%～8.30% 和 5.65%～15.64%；通过对 3 种工具化合物的剂量-效应关系检测，获得GABA 和 Dia 的 EC50值分别为(137.4±26.3)nmol·L-1和(3.5±0.7)μmol·L-1,Gab 的 50% 抑制效应浓度为(164.9±36.6)nmol·L-1。结论 本研究建立并优化了高通量检测方法，该方法特异性好、精密度高、稳定可靠、灵敏度高，为靶向GABAAR的先导化合物发现提供了良好的技术基础。