摘要
目的:探究磷酸二酯酶2A(Phosphodiesterase 2A,PDE2A)在年龄相关性黄斑变性(Age-related macular degeneration,AMD)中的可能作用及其对脉络膜新生血管(Choroidal neovascularization,CNV)形成的影响。方法:通过qRT-PCR法检测36例湿性AMD患者(AMD组)和36例健康体检者(Healthy组)的血清PDE2A水平。将恒河猴脉络膜血管内皮细胞系(RF/6A)分为Normoxia组、Hypoxia组、Hypoxia+NC组、Hypoxia+PDE2A组。使用Lipofectamine2000分别将NC-shRNA和PDE2A-shRNA慢病毒转染入Hypoxia+NC组和Hypoxia+PDE2A组,转染后,根据分组情况,在RPMI 1640培养基中添加200 m M CoCl2来对RF/6A细胞进行低氧处理。建立了激光诱导的CNV小鼠模型后,将36只建模成功的小鼠随机分为Model组、NC-shRNA组和PDE2A-shRNA组,每组12只。选取12只未建模的小鼠作为Control组。分别对NC-shRNA组和PDE2A-shRNA组小鼠玻璃体腔注射相应慢病毒,共治疗7 d。然后对小鼠进行眼底荧光血管造影(fundus fluorescein angiography,FFA)检查和眼球HE染色。使用相应试剂盒检测小鼠脉络膜组织中ROS、SOD、MDA的含量。通过qRT-PCR或Western blot检测RF/6A细胞或脉络膜组织中PDE2A、VEGFA、VEGFR2、HIF-1α、NOX2、NOX4和NF-κB p65的表达。结果:与Healthy组相比,AMD组患者的血清PDE2A水平显著升高(1.00±0.23 vs 3.09±1.46,P<0.001)。与Hypoxia组相比,Hypoxia+PDE2A组RF/6A细胞的闭合管腔数量减少(P<0.05),PDE2A、VEGFA、VEGFR2和HIF-1α的m RNA和蛋白表达水平均降低(P<0.05)。与Model组相比,PDE2A-shRNA组CNV小鼠脉络膜病变明显减轻,血管生成和脉络膜增明显减少,CNV相对荧光强度降低(P<0.05),脉络膜组织中的PDE2A、VEGFA、VEGFR2和HIF-1α的m RNA和蛋白表达水平均降低(P<0.05)。与Model组相比,PDE2A-shRNA组小鼠脉络膜组织中的ROS和MDA含量均降低,SOD含量升高(P<0.05)。与Model组相比,PDE2A-shRNA组小鼠脉络膜组织中的NOX2、NOX4和细胞核NF-κB p65蛋白相对表达量均降低(P<0.05)。结论:PDE2A通过影响脉络膜血管生成和NADPH氧化酶/ROS/NF-κB通路参与年龄相关性黄斑变性。
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单位西安医学院第二附属医院; 延安市人民医院