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摘要
目的: TTV(Torque teno virus)自1997年发现以来由于其极高人群感染率和显著的遗传多样性而引起了广泛关注。虽然TTV与多种疾病的相关性仍在探索中，但其在评估免疫功能方面的重要性成为近年来的研究热点。TTV研究及应用面临的重要问题之一是缺乏一个既广泛又高效、便捷、灵敏的检测方法。现有的检测技术主要依赖于分子生物学的诊断方法，如PCR和real-time PCR，但由于TTV基因组多样性和变异性强，导致这些方法检测灵敏度及覆盖范围受到了明显的影响；而EIA和ELISA虽可用于检测TTV抗体，但在区分当前感染和既往感染方面存在困难。这些问题限制了人们对TTV感染更深入的研究及其作为疾病标志物应用潜力的探索。方法: 为了更精确、灵敏的检测TTV，本研究分析了目前公布的所有亚型的TTV基因序列，在此基础上建立了一种基于UTR区域的real-time PCR检测方法，并与文献报道应用较为广泛的PCR检测方法进行了对比。结果: 本研究建立的方法在1×107 ～ 1×101 copies/μL 标准品浓度范围内具有良好的线性关系，相关系数为1.000，斜率为-3.446，检测下限为1×101 copies/μL。重复性试验结果显示，组内变异系数为7.22％，表明本方法重复性、稳定性较强。针对30份临床样本，使用本研究建立的real-time PCR检测方法及目前被多个研究所使用的4套引物进行对比。结果表明，本研究所建立的方法灵敏度显著高于文献中报道的4种方法(P＜0.01)；Sanger测序结果表明，本方法检测出的30份阳性样本均为TTV，检测特异性为100%。结论: 本研究采用基于TaqMan探针的real-time PCR检测方法，检测灵敏性高、覆盖基因型范围广，尤其对于TTV病毒载量较低的情况下能够进行定量检测，对于TTV病毒的致病性及作为免疫标志物的应用提供重要的技术支持。
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