CHRNA7基因荧光定量PCR检测方法的建立

作者：刘益巧; 孙志华; 钱江; 长孙东亭; 罗素兰^*

来源：热带生物学报, 2019, 10(02): 178-183.

DOI：10.15886/j.cnki.rdswxb.2019.02.013

• α7 nAChR
• 宫颈癌
• 荧光定量PCR

为了检测烟碱型乙酰胆碱受体(nicotine acetylcholine receptors,nAChRs)α7亚基基因(CHRNA7)的表达,笔者根据人源CHRNA7基因序列设计引物,PCR扩增CHRNA7基因,亚克隆到pMD-18T载体中后,测序鉴定并制备重组质粒,以梯度稀释的重组质粒为模板,进行荧光定量PCR来绘制标准曲线,并进行灵敏度和重复性实验,成功建立了检测CHRNA7基因的荧光定量PCR方法。该方法最低可检测101 copies·μL-1,且重复性良好,在104,105,106 copies·μL-1时,5次重复的变异系数分别是1.22%,1.90%,2.63%。此外,还对人宫颈癌细胞SiHa和人正常宫颈细胞Ect1/E6E7中α7 nAChR亚基基因表达量进行检测,结果显示,α7 nAChR亚基在SiHa细胞系的表达明显低于其在Ect1/E6E7细胞系中的表达(P=0.015)。

• 单位
  海南大学