实时聚合酶链反应熔解曲线法快速检测耐多药结核分枝杆菌

作者：王峰; 崔运勇; 胡思玉; 桂静; 杨慧; 李庆阁; 刘小立

来源：中华结核和呼吸杂志, 2011, 34(12): 888-893.

DOI：10.3760/cma.j.issn.1001-0939.2011.12.003

• 分枝杆菌,结核
• 抗药性,多药
• 利福平
• 异烟肼
• 突变
• 聚合酶链反应

目的应用实时PCR熔解曲线法快速检测MTB对利福平和异烟肼的耐药性,并与比例法检测结果进行比较。方法收集深圳市2007—2009年耐药监测项目、全国耐药基线调查项目和深圳市慢性病防治中心门诊患者临床分离株311株,采用实时PCR熔解曲线法检测rpoB基因耐药突变热点区、ahpC启动子区(44～-30及-15～-3位点)、inhA启动子区(-17～-8位点)、inhA 94和katG315位耐药突变,并与耐药基因测序及表型药敏试验结果进行比较。以比例法药敏试验结果作为MTB药敏试验的金标准,评价实时PCR熔解曲线法的敏感度、特异度与金标准的符合率。结果实时PCR熔解曲线法2～3 h即可完成检测,扩增和结果判定在1个反应管内完成。检测利福平耐药的敏感度为97.8%,特异度为97.1%,准确性为97.4%;检测异烟肼耐药的敏感度为86.6%,特异度为98.7%,准确性为92.6%。对耐多药MTB的检测敏感度为88.6%,特异度为100.0%,重复性为100.0%。结论实时PCR熔解曲线法检测MTB对利福平和异烟肼耐药性,与比例法检测结果比较具有很好的一致性,且具有快速、准确的优点,有较好的临床应用价值。

• 单位
  深圳市慢性病防治中心; 厦门大学; 生命科学学院