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摘要
目的 探讨N-乙酰半胱氨酸(NAC)对于甲苯二异氰酸酯(TDI)诱导人支气管上皮细胞(HBECs)自噬激活的影响。方法 (1)制备TDI-人血清白蛋白(HSA)偶联物，分别采用Gutmann法和BCA蛋白定量法测定偶联物中TDI和HSA的水平。(2)以不同浓度TDI-HSA(0、40.00、80.00和120.00 mg/L)处理HBECs 12 h,采用活细胞成像技术检测细胞中活性氧(ROS)水平，酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清液中IL-4和IL-6的水平，蛋白质印迹法(Western blot)检测自噬相关蛋白腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、磷酸化AMPK(p-AMPK)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷酸化mTOR(p-mTOR)、酵母自噬相关基因6(Beclin1)、微管相关蛋白1A/1B-轻链3(LC3)和泛素结合蛋白p62的表达水平。(3)采用NAC(5 mmol/L)预处理HBECs 4 h后，再用TDI-HSA(120.00 mg/L)染毒12 h,检测细胞中ROS及IL-4、IL-6的水平，测定自噬相关蛋白AMPK、p-AMPK、mTOR、p-mTOR、Beclin1、LC3、p62的表达水平。结果 (1)合成的TDI-HSA偶联物中TDI和HSA质量浓度分别为21.90 mg/L、1 955.00 mg/L,摩尔比为4.41。(2)随着TDI-HSA染毒剂量的增加，HBECs细胞中ROS和IL-4、IL-6水平明显增加，差异具有统计学意义(P<0.05)。TDI-HSA中(80.00 mg/L)、高(120.00 mg/L)剂量染毒组自噬相关蛋白p-AMPK/AMPK比值、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值和Beclin1表达明显增加，p-mTOR/mTOR比值和p62表达明显减少，差异均有统计学意义(P<0.05)。(3)与TDI-HSA高剂量染毒组相比，TDI-HSA+NAC组HBECs细胞中ROS和IL-4、IL-6水平明显降低，差异具有统计学意义(P<0.05);自噬相关蛋白p-AMPK/AMPK比值、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值和Beclin1表达明显降低，p-mTOR/mTOR比值和p62表达明显升高，差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 通过抑制TDI-HSA诱导的HBECs中ROS水平，可显著抑制HBECs自噬激活，并降低细胞上清液中IL-4、IL-6的水平。
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