摘要

目的 了解云南省2019年人感染H9N2禽流感病毒(avian influenza virus, AIV)分子特征,为云南省人禽流感防控提供科学依据。方法 通过实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(real-time reverse transcription polymerase chain reaction, real-time RT-PCR)方法对2例流感样病例标本进行流感病毒分型检测,应用Illumina Miseq高通量测序仪进行病毒基因组序列测定,使用Mega7.0软件进行血凝素(hemagglutinin, HA)和神经氨酸酶(neuraminidase, NA)基因序列比对和进化树构建。结果 Real-time RT-PCR检测结果显示2例流感样病例标本为H9N2亚型阳性,通过基因组序列测定,获得2份标本的HA和NA全长。序列系统进化分析表明2株AIV HA和NA均与A/Chicken/Zhejiang/HJ/2007在同一进化分支中,属于G57型。2株AIV HA核苷酸和氨基酸同源性分别为93.92%和95.00%,NA核苷酸和氨基酸同源性分别为93.31%和82.03%,与2015—2020年国内获得的人感染H9N2流行株的HA核苷酸(氨基酸)同源性分别为92.29%~96.94%(93.77%~98.43%)、92.84%~94.92%(94.18%~96.23%),NA核苷酸(氨基酸)同源性分别为91.81%~97.60%(77.82%~94.83%)、94.38%~97.22%(85.47%~94.55%)。2株AIV HA蛋白裂解位点序均为PSRSSR↓GLF,符合低致病性禽流感的特征,HA蛋白受体结合位点分析显示,109、161、163、191、202、203、234位氨基酸与参考株保持一致,而198位氨基酸突变为T。HA蛋白上还发现N166D和168N突变,两株AIV均具有7个潜在糖基化位点。NA基因红细胞结合位点分析发现369、402、403、432处存在氨基酸变异,NA基因均表现为63~65位氨基酸缺失,2株AIV分别存在4个和5个潜在糖基化位点,未发现耐药位点突变。结论 云南省H9N2 AIV的HA和NA基因上受体结合位点、红细胞结合位点和糖基化位点都有不同程度的变异,应加强监测与防控。

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