人体肝脏靶向性新型AAV血清型载体的研发

作者：宁秦洁; 陈颖; 闫梦迪; 胡泽岚; 吴侠; 杜增民; 郑静; 肖啸^*

来源：华东理工大学学报, 2020, 46(03): 404-410.

DOI：10.14135/j.cnki.1006-3080.20190312002

• 腺相关病毒(AAV)
• 基因治疗
• 新型AAV血清型
• DNA shuffling
• 靶向
• 肝脏细胞

通过DNA shuffling技术选择8种AAV(AAV1～AAV4,AAV6～AAV9)cap基因序列进行cap基因的DNA改组,获得AAV突变体基因库。将突变体基因库插入到含有AAV2Rep基因和ITR序列的质粒中,最终获得了大于107的独立克隆(具有全套AAV基因组序列)。通过转化实验获得随机感染质粒文库(pIRC)。将所得质粒经过共转染HEK293细胞,72 h后收集纯化病毒,获得感染性AAV文库。利用野生型5型腺病毒(Wild Type Ad5,wt Ad5)辅助感染人肝癌Hep G2细胞,进行筛选后,最终在肝细胞中富集获得1种新型AAV血清载体AAVXL12。通过将携带GFP基因的不同AAV血清型载体感染Hep G2细胞,观察到不同程度的绿色荧光的表达,最终显示筛选到的AAV血清型载体AAVXL12介导的GFP基因表达效果最好,荧光强度最强。

• 单位
  华东理工大学