摘要

目的:研究重楼皂苷I(PPI)抑制结直肠癌细胞生长的作用及其分子机制。方法:培养RKO细胞,分为空白组和浓度为0.6、0.8、1.0 μmol·L-1的PPI处理组,培养HRT-18细胞,分为空白组,浓度为1.2、1.4、1.6 μmol·L-1的PPI处理组,细胞增殖毒性实验、平板克隆形成实验及共聚焦高内涵细胞成像分析系统检测PPI对结直肠癌增殖及形态的影响;流式细胞术检测结直肠癌细胞凋亡率;pQCXIP-GFP-LC3质粒转染实验检测PPI处理后,结直肠癌细胞自噬体的形成情况;蛋白免疫印迹法检测凋亡相关蛋白胱天蛋白酶(Caspase)-3、Caspase-8和PARP的表达、自噬相关蛋白LC3 Ⅱ的表达及Hippo信号通路蛋白LATS1、YAP的表达及磷酸化水平;plvx-Flag-YAP质粒转染实验,过表达YAP后,用PPI处理,细胞增殖毒性实验检测结直肠癌细胞增殖,蛋白免疫印迹法检测结直肠癌细胞LC3Ⅱ、PARP的表达;对SwissADME预测PPI的药代动力学参数。结果:与空白组比较,PPI组的结直肠癌细胞的存活率及克隆形成能力明显降低(P<0.01),并且PPI处理组的结直肠癌细胞的细胞面积显著降低,圆度显著升高(P<0.01);与空白组比较,PPI处理组的结直肠癌细胞凋亡率显著增加(P<0.01),并且PPI处理组的结直肠癌细胞中凋亡蛋白Caspase-3及Caspase-8蛋白前体的表达降低,PARP切割增加(P<0.01);与空白组比较,PPI处理组的结直肠癌细胞中自噬相关蛋白LC3Ⅱ的表达水平明显增加,并且促进自噬体的形成(P<0.01);与空白组比较,PPI处理组的结直肠癌细胞中YAP蛋白的表达明显降低,并且磷酸化LATS1、YAP的表达明显升高(P<0.01);与空白组比较,过表达YAP能显著拮抗PPI对结直肠癌细胞的凋亡自噬活化作用及增殖抑制作用(P<0.01);SwissADME模拟结果显示PPI具有较好的类药活性。结论:PPI能通过靶向激活Hippo信号通路诱导结直肠癌细胞发生凋亡和自噬,进而抑制其增殖。

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