重楼皂苷I激活Hippo信号诱导结直肠癌细胞凋亡及自噬的作用机制

作者：任宇亮; 欧虹灵; 吴慧; 万芳; 刘莹; 司渊

来源：中国实验方剂学杂志, 2022, 1-13.

DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.202202423

• 重楼皂苷I
• 结直肠癌
• 凋亡
• 自噬
• Hippo信号通路

目的：研究重楼皂苷I（PPI）抑制结直肠癌细胞生长的作用及其分子机制。方法：培养RKO细胞，分为空白组和浓度为0.6、0.8、1.0 μmol·L-1的PPI处理组，培养HRT-18细胞，分为空白组，浓度为1.2、1.4、1.6 μmol·L-1的PPI处理组，细胞增殖毒性实验、平板克隆形成实验及共聚焦高内涵细胞成像分析系统检测PPI对结直肠癌增殖及形态的影响；流式细胞术检测结直肠癌细胞凋亡率；pQCXIP-GFP-LC3质粒转染实验检测PPI处理后，结直肠癌细胞自噬体的形成情况；蛋白免疫印迹法检测凋亡相关蛋白胱天蛋白酶（Caspase）-3、Caspase-8和PARP的表达、自噬相关蛋白LC3 Ⅱ的表达及Hippo信号通路蛋白LATS1、YAP的表达及磷酸化水平；plvx-Flag-YAP质粒转染实验，过表达YAP后，用PPI处理，细胞增殖毒性实验检测结直肠癌细胞增殖，蛋白免疫印迹法检测结直肠癌细胞LC3Ⅱ、PARP的表达；对SwissADME预测PPI的药代动力学参数。结果：与空白组比较，PPI组的结直肠癌细胞的存活率及克隆形成能力明显降低（P＜0.01），并且PPI处理组的结直肠癌细胞的细胞面积显著降低，圆度显著升高（P＜0.01）；与空白组比较，PPI处理组的结直肠癌细胞凋亡率显著增加（P＜0.01），并且PPI处理组的结直肠癌细胞中凋亡蛋白Caspase-3及Caspase-8蛋白前体的表达降低，PARP切割增加（P＜0.01）；与空白组比较，PPI处理组的结直肠癌细胞中自噬相关蛋白LC3Ⅱ的表达水平明显增加，并且促进自噬体的形成（P＜0.01）；与空白组比较，PPI处理组的结直肠癌细胞中YAP蛋白的表达明显降低，并且磷酸化LATS1、YAP的表达明显升高（P＜0.01）；与空白组比较，过表达YAP能显著拮抗PPI对结直肠癌细胞的凋亡自噬活化作用及增殖抑制作用（P＜0.01）；SwissADME模拟结果显示PPI具有较好的类药活性。结论：PPI能通过靶向激活Hippo信号通路诱导结直肠癌细胞发生凋亡和自噬，进而抑制其增殖。

• 单位
  基础医学院; 湖北医药学院