大鼠海马内去整合蛋白和金属蛋白水解酶10和17基因的表达

作者：李振国; 杨期东; 毛诗贤; 王改青; 黄晓松

来源：中国临床康复, 2006, (02): 85-87.

• 阿尔茨海默病
• 水解酶类
• 动物实验

目的:观察大鼠海马内去整合蛋白和金属蛋白水解酶10和17基因表达的改变。方法:实验于2004-09/2005-06在中南大学湘雅医院神经病学实验室(实验室B级)完成。选择青龄(2月龄)健康雌性SD大鼠10只,老龄(20月龄)健康雌性SD大鼠10只。①反转录反应:反应体系20μL,取5μg(2μL)总RNA,加1g/LOligo(dT)180.5μL,焦碳酸二乙酯处理过的水8.5μL,70℃保持5min,然后冰上骤冷30s,短暂离心3～5s,再加5×反转录buffer4μL,10mmol/LdNTPMix2μL,4U/μLRnasin0.5μL,焦碳酸二乙酯处理过的水1.5μL,轻轻混匀、离心3～5s,37℃保持5min,最后加200U/μLM-Mulv反转录酶1μL,42℃保持1h,70℃保持10min变性,冰上冷却10min,反转录产物(cDNA)于-20℃保存备用。②聚合酶链反应:总反应体系25μL,包括10×聚合酶链反应buffer2.5μL,25mmol/L氯化镁1.5μL,10mmol/LdNTP1μL,2U/μLTaq酶0.5μL,上述反转录产物cDNA2μL,50μmol/L上游目的引物0.5μL,50μmol/L下游目的引物0.5μL,ddH2O16.5μL。各程序均采用95℃5min预变性,94℃,45s、退火温度30s,72℃1min进行32个循环,最后72℃延伸10min。退火温度,去整合蛋白和金属蛋白水解酶10:62.3℃;去整合蛋白和金属蛋白水解酶17:50.2℃;肌动蛋白:46℃。取聚合酶链反应产物5μL于15g/L琼脂糖凝胶电泳,然后在凝胶图像处理系统上扫描,测定各目的基因和肌动蛋白扩增产物的吸光度值,分别计算其比值,即目的基因值=目的基因吸光度值/肌动蛋白吸光度值。结果:纳入动物20只,均进入结果分析。①老龄大鼠去整合蛋白和金属蛋白水解酶10的表达水平(1.2170±0.4308)低于青龄大鼠(1.5050±0.4958),但两组比较差异无显著性(t=1.239,P>0.05)。②老龄大鼠去整合蛋白和金属蛋白水解酶17的表达水平(1.5720±0.5670)高于青龄大鼠(0.9740±0.3281),但两组比较差异无显著性(t=-1.476,P>0.05)。结论:去整合蛋白和金属蛋白水解酶10和17的基因表达水平可能不是老龄人易发阿尔茨海默病的生物学基础。

• 单位
  中南大学湘雅医院