纳米级siRNA与壳寡糖复合物体内外抗脉络膜新生血管作用研究

作者：刘洪安; 曲景灏; 张绍丹; 李若溪^*

来源：中国实用眼科杂志, 2015, 33(03): 311-315.

• 小干扰RNA
• 人脐静脉内皮细胞
• 壳寡糖
• 脉络膜新生血管

目的观察小干扰RNA与壳寡糖(siRNA与COS)纳米复合物体内外抗脉络膜新生血管的作用。方法实验研究。对2011年9月至2012年6月以提取人脐静脉内皮细胞(HUVEC)培养并传代。用激光粒度仪检测siRNA与COS纳米复合物的粒径与zeta电位。用琼脂糖凝胶电泳评价siRNA与COS质量比分别为1/1,1/5时所形成的siRNA复合物的情况。利用SRB方法评价COS分别为5 μg/mL、25 μg/mL、50 μg/mL时,对人脐静脉内皮细胞增殖的抑制情况。以及50 nmol siRNA浓度条件下,siRNA/COS质量比为1/1、1/5时形成的复合物对人脐静脉内皮细胞增殖的抑制作用。采用单因素方差分析方法进行组间比较。利用荧光素眼底血管造影方法观察不同质量比的siRNA与COS(1/1、1/5)减轻血管荧光素渗漏的情况。结果激光粒度仪检测显示随着COS的量增加,siRNA与COS纳米复合物的粒径在93.9～459.8 nm范围内变化,zeta电位在-19.5～17.8 mV范围内变化。琼脂糖凝胶电泳显示当siRNA与COS质量比为1/5时,siRNA能够完全与壳寡糖结合。质量比为1/1时,只有部分siRNA与壳寡糖相结合。SRB结果显示,两种质量比所形成的复合物对HUVEC增殖的抑制作用均强于对照组,siRNA与COS质量比分别为1:1,1:5时,增殖率分别为(68.7±12.2)%,(58.8±10.1)%vs对照组100%,差异有统计学意义(F=12.321,P=0.008)。COS 5μg/mL、25μg/mL、50μg/mL三个剂量组均未显示出对HUVEC增殖的抑制作用(F=0.713,P=0.558)。2周时,siRNA与COS组,激光斑处荧光渗漏较对照组明显减轻。结论该研究表明siRNA与壳寡糖纳米复合物在抗脉络膜新生血管中可能起到积极的作用,且毒性较低。

• 单位
  沈阳市第四人民医院; 大连医科大学