In Situ PLA技术原位分析MTA1与NuRD复合体其他组分的相互作用

作者：刘健; 王海娟; 刘群; 李春晓; 刘欢; 黄骁舾; 孟希亭; 赵枚; 林晨; 黄常志; 钱海利

来源：癌症进展, 2014, 12(04): 394-398.

DOI：10.11877/j.issn.1672-1535.2014.12.04.17

• MTA1
• NuRD复合体
• 相互作用
• In Situ PLA技术

目的原位检测肿瘤转移相关蛋白MTA1与NuRD复合体其他组分-Mi2、HDAC2及MBD3的相互作用并分析MTA1/NuRD复合体在HCT116细胞中的分布情况。方法首先利用co-IP技术体外验证MTA1与NuRD复合体其他组分Mi2、HDAC2及MBD3在HCT116细胞裂解液中的相互作用。然后利用In Situ PLA技术,体内原位检测MTA1与三者的相互作用,并根据镜下阳性荧光信号数目,比较MTA1与Mi2、HDAC2及MBD3之间的作用强弱;根据相互作用位点的亚细胞分布情况,分析间期及M期MTA1/NuRD复合体的核质分布情况。结果首次从体内原位水平证实MTA1与NuRD复合体其他组分-Mi2、HDAC2及MBD3的相互作用;其作用强度HDAC2最高,Mi2次之,MBD3最弱;首次发现MTA1/NuRD复合体存在很明显的胞质分布(约占总量的1/4);另外,我们还首次发现在M期MTA1/NuRD复合体不再位于核区,而是位于染色体外周。结论In Situ PLA技术是一项有效的原位检测蛋白相互作用的新技术;MTA1/NuRD复合体可能参与MTA1胞质中功能的发挥;并且其胞质分布可能参与M期进程调控。

• 单位
  中国医学科学院北京协和医学院; 首都医科大学附属北京朝阳医院; 分子肿瘤学国家重点实验室; 首都医科大学附属北京妇产医院