口蹄疫病毒3D基因的真核表达及其表达产物的功能分析

作者：鲁彬

来源：中国兽医科学, 2006, (10): 800-804.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2006.10.007

• 口蹄疫病毒
• RNA依赖的RNA聚合酶
• 真核表达
• 链特异性荧光定量RT-PCR foot-and-mouth disease virus(FMDV)
• RNA-dependent RNA polymerase
• eukaryotic expression
• strand-specific real-time RT-PCR

利用RT-PCR技术扩增口蹄疫病毒(FMDV)编码RNA依赖的RNA聚合酶的3D基因,经测序确认后将其克隆到真核表达质粒载体pcDNA3.1(+)中,重组质粒pcDNA3.1(+)-3D经HindⅢ、XbaⅠ双酶切后转染至BHK-21细胞,用纯化的目的蛋白进行Western-blotting鉴定,并预测该3D基因表达产物的三级结构。结果显示,获得分子质量约55 ku的单一3D基因表达产物,其三级结构较为保守。利用RNA细胞内复制体系和荧光定量RT-PCR技术,证明3D基因表达产物在细胞内可促进口蹄疫病毒基因组的复制。