牛支原体P48蛋白的表达及间接血凝检测方法的建立与应用

作者：简莹娜; 储岳峰; 赵萍; 陈胜利; 贺英; 秦明明; 潘玮玮; 刘永生; 逯忠新

来源：中国兽医科学, 2015, 45(03): 241-246.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2015.03.003

• 牛支原体
• 重组P48蛋白
• 可溶性表达
• 间接血凝试验
• 抗体检测

优化并合成牛支原体的p48基因,将其克隆到pET-32a(+)表达载体上后,转化大肠杆菌BL21(DE3),16℃低温诱导表达,获得可溶性表达的大小约66ku的重组P48蛋白。将纯化后的重组P48蛋白致敏戊二醛和鞣酸处理过的绵羊红细胞,建立了检测牛支原体抗体的间接血凝试验。重组P48蛋白致敏红细胞的最佳质量浓度是2040μg/mL,牛支原体超免疫血清抗体效价达1∶2 0481∶4 096。该方法对牛肺疫、牛巴氏杆菌病、牛病毒性腹泻病、布氏杆菌病、结核病、口蹄疫、牛生殖道支原体感染、里奇氏支原体感染、大肠杆菌病阳性血清的检测结果均为阴性。该方法的特异性为100%,敏感性为93.33%。与国外商品化的牛支原体ELISA试剂盒相比,平均符合率为96.15%。对833份田间血清和1 084份乳清进行检测,阳性率分别是15.37%和19.56%。结果表明,该方法敏感性高、特异性强和重复性好,可用于牛支原体抗体水平检测、牛支原体病的辅助诊断和流行病学调查。

• 单位
  中国农业科学院兰州兽医研究所; 家畜疫病病原生物学国家重点实验室; 农业部