金黄色葡萄球菌α-毒素溶血活性测定方法优化及初步应用

作者：林海涛; 郭京蓉; 周继唯; 袁玉兰^*

来源：国际生物制品学杂志, 2022, 45(01).

• 金黄色葡萄球菌
• α-毒素
• 溶血活性
• 抗体, 中和

目的优化金黄色葡萄球菌α-毒素(α-toxin, AT)溶血活性测定方法, 用于无毒突变AT(non-toxic mutant AT, mAT)特异性血清抗体体外功能性评价和中和抗体滴度测定。方法使用AT裂解兔红细胞, 释放血红蛋白, 通过分光光度法检测溶血活性, 并对该方法中的孵育时间、兔红细胞终浓度、Triton X-100浓度进行优化, 同时验证方法重复性。对mAT特异性血清抗体进行体外功能性评价, 绘制AT溶血曲线, 计算AT溶血率50%时的浓度, 检测血清半数中和抗体滴度。结果 AT溶血活性最适检测条件为:孵育时间90 min, 兔红细胞终浓度为2%(V/V), Triton X-100浓度为0.25%。此条件下, 分别加入mAT和含mAT的多价抗原血清抗体, 对AT溶血活性均起到明显的抑制作用。AT溶血率50%时浓度为1.75 μg/ml, 变异系数3.75%。mAT和含mAT的多价抗原血清抗体的半数中和抗体滴度初步结果均为1∶64。结论优化的AT溶血活性检测方法重复性良好, 且检测时间较短, 可用于特异性血清抗体体外功能性评价和中和抗体滴度测定。