温化蠲痹方对胶原诱导性关节炎大鼠N6-甲基腺苷甲基化的影响

作者：周海丽; 黄柳云; 刘喜德^*

来源：上海中医药杂志, 2022, 56(10): 65-70.

DOI：10.16305/j.1007-1334.2022.2205023

• 类风湿关节炎
• 胶原诱导性关节炎
• 温化蠲痹方
• N6-甲基腺苷
• 大鼠模型
• 中药研究

目的 研究温化蠲痹方对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠炎症及N6-甲基腺苷(m6A)甲基化的影响。方法 选用雌性Wistar 大鼠 50 只，随机分为正常组(n=10)和造模组(n=40)。采用尾部皮内多点注射乳化剂的方法建立 CIA 模型。采用容积法(排水体积)和关节炎指数(AI)评分法对模型进行评估，足肿胀体积>1.6 mL、AI评分≥4分视为造模成功。将造模成功的 30只 CIA大鼠随机分为模型组(n=10)、温化蠲痹方组(中药组，n=10)、甲氨蝶呤(MTX)组(n=10)。中药组给予温化蠲痹方，剂量为 22.9 g·kg-1·d-1;MTX 组给予甲氨蝶呤混悬液，剂量为 0.78 mg·kg-1，每周 1 次；正常组和模型组给予等量质量分数为 0.9% 的氯化钠溶液，每日 1次。治疗 30 d取各组大鼠膝关节滑膜。采用 HE染色法检测滑膜病理情况，以 realtime PCR 法检测滑膜中甲基转移酶样蛋白 3(Mettl3)、甲基转移酶样蛋白 14(Mettl14)、肥胖相关蛋白(Fto)、Alkb 同系物 5(Alkbh5)、Yth N6-甲基腺苷RNA 结合蛋白 1(Ythdf1)、Yth N6-甲基腺苷 RNA 结合蛋白 2(Ythdf2)基因表达及关节炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)基因表达水平，并采用 Western blot 法检测 Mettl3、Fto 蛋白表达。结果 与正常组比较，模型组大鼠足肿胀体积、AI评分明显升高，Mettl3、Mettl14、Fto、Alkbh5、Ythdf1 基因表达增加，Ythdf2 基因表达降低，TNF-α、IL-1β、IL-6基因表达增加，Mettl3、Fto蛋白表达增加，差异均有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较，中药组和 MTX 组足肿胀体积、AI评分均随时间延长逐渐降低，Mettl3、Mettl14、Fto、Alkbh5、Ythdf1 基因表达降低，Ythdf2 基因表达增加，TNF-α、IL-1β、IL-6 基因表达降低，Mettl3、Fto 蛋白表达降低，差异均有统计学意义(P<0.05)。与 MTX 组比较，中药组 Mettl3、Mettl14、Fto、Alkbh5、Ythdf1基因表达降低，Ythdf2 基因表达增加，TNF-α、IL-1β、IL-6 基因表达降低，Mettl3、Fto 蛋白表达降低，差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 中药温化蠲痹方可能通过影响 m6A甲基化来发挥抗炎作用，从而对CIA起到治疗效果。

• 单位
  第二临床医学院; 扬州市中医院; 浙江中医药大学