摘要
目的通过卵母细胞体外成熟(in vitro maturation,IVM)技术,探讨乌萸汤对体外培养的高龄小鼠卵母细胞能量代谢相关影响。方法 6周龄C57BL/6J雌性小鼠促排后取卵母细胞培养于M2培养基为青年组,24周龄C57BL/6J雌性小鼠卵母细胞为实验组,将实验组卵母细胞分别培养于基础培养基、乌萸汤含药血清培养基、山茱萸环烯醚萜苷类提取物培养基中,并称其为高龄组、乌萸汤组、山茱萸提取物组。各组培养24小时后分别检测各组卵母细胞的第一极体排出率、ATP含量、线粒体数量及膜电位变化、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性、活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量以及腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPKα)、磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(p-AMPKα)、线粒体增生有关的过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅助活化因子1α(peroxisome proliferators-activated receptor gamma coactivator-1α,PCG-1α)蛋白的表达。结果 (1)与青年组相比,高龄组第一极体排出率、ATP含量、线粒体数量及膜电位变化、SOD酶活性均有所降低,ROS含量升高,AMPKα、p-AMPKα、PGC-1α蛋白的表达降低(P <0.05)。(2)与高龄组相比,乌萸汤组第一极体排出率、ATP含量、线粒体数量、SOD酶活性均有所升高,AMPKα、PGC-1α蛋白表达量有所增多(P <0.05),但线粒体膜电位变化、ROS及p-AMPKα含量均无明显差异(P> 0.05)。(3)与高龄组相比,山茱萸提取物组第一极体排出率、ATP含量、线粒体数量、SOD酶活性、p-AMPKα蛋白含量有明显升高(P <0.05),线粒体膜电位变化、ROS、AMPKα、PGC-1α蛋白表达量无明显差异(P>0.05)。结论乌萸汤能够通过影响高龄小鼠卵母细胞的线粒体功能,从而改善其能量代谢和氧化应激状态,促进卵母细胞培养。
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单位北京中医药大学东方医院; 北京中医药大学