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摘要
目的 应用抑制消减杂交技术(SSH)构建胰腺癌和正常胰腺组织间差异表达的抑制消减 cDNA文库。方法 分别提取胰腺癌(tester)和癌旁正常胰腺组织(driver)中的总RNA和mRNA,合成 双链cDNA,经Rsa 1酶切后,将胰腺癌双链cDNA分为两组,分别加上不同的接头,再与正常胰腺组织 cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR,分离出胰腺癌差异表达基因的cDNA片段。将该差异表达 片段克隆至T／A载体,并转化大肠杆菌TOP 10F',经蓝白斑筛选后,再用PCR方法筛选阳性克隆,从而 构建胰腺癌抑制消减cDNA文库。结果 文库扩增后得到257个白色克隆,随机挑取50个阳性克隆进行 PCR扩增分析,其中47个克隆有插入片段,克隆阳性率为94％。片段大小主要集中在300~600bp之间。结 论成功构建了人胰腺癌抑制消减cDNA文库,为进一步筛选、克隆胰腺癌特异性表达基因奠定了基础。
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单位长海医院消化内科; 中国人民解放军第二军医大学
