摘要
目的 敲除伤寒沙门菌hns基因,分析其对伤寒沙门菌主要毒力基因转录的影响。方法 本研究利用自杀质粒法与RED重组法敲除伤寒沙门菌hns基因;RED重组法先构建phoPQ基因缺失株(ΔphoPQ),再敲除hns基因(ΔphoPQ-hns);提取ΔphoPQ与ΔphoPQ-hns的总RNA,实时定量RT-PCR检测毒力基因hilA、invF、ssrB、ssaB、catB、pltB的mRNA水平,分析HNS对以上毒力基因的调控作用。结果 自杀质粒法与RED重组法均无法直接敲除伤寒沙门菌hns基因;伤寒沙门菌缺失phoPQ基因后,可成功敲除hns基因;ΔphoPQ-hns中毒力基因hilA、invF、ssrB、ssaB、catB和pltB的mRNA水平明显高于ΔphoPQ(均P<0.01)。结论 hns为伤寒沙门菌的毒力负向调控基因,可抑制伤寒沙门菌多个毒力基因的表达。
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