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摘要
目的探讨Necroptosis与凋亡在激素诱导成骨细胞死亡中的相互作用。方法向MC3T3-E1细胞内添加浓度为10-6mol/L的地塞米松诱导细胞死亡,随后在本组细胞中分别添加凋亡抑制剂z-VAD-fmk(40μmol/L)和Necroptosis抑制剂Necrostatin-1(40μmol/L),作用2 h后,AV/PI双染观察细胞死亡的变化情况,并对细胞进行Hoechst染色计算凋亡率,用透射电镜观察细胞超微结构的改变,测定细胞线粒体膜电位和ATP水平,对Necroptosis和凋亡通路的相关蛋白进行Western blot检测。结果10-6mol/L地塞米松可以诱导MC3T3-E1细胞同时发生凋亡和Necroptosis。AV/PI双染的结果发现,当凋亡受到抑制后,更多的细胞发生坏死(P<0.01),而透射电镜结果也证实细胞发生了坏死样改变,Hoechst染色结果发现,凋亡细胞数明显减少(P<0.01);当使用Necroptosis特异性抑制剂Necrostatin-1将这种作用阻断后,包括Hoechst染色和AV/PI双染的结果都证实凋亡的细胞数明显增多(P<0.01),同时,在这一作用过程中伴随着MMP及ATP的明显变化(P<0.01)。结论在激素诱导成骨细胞死亡过程中,Necroptosis和凋亡在一定条件下可以相互转化,这一转化过程中伴随着线粒体功能的明显改变。
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