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摘要
目的 探讨蛋白质-L-异天冬氨酸（D-天冬氨酸）-甲基转移酶（PCMT1）在胃癌中的表达及对预后的影响，并分析其潜在的作用机制。方法 UALCAN数据库在线分析PCMT1在胃癌组织的表达情况，通过DAVID数据库进行基因本体注释（GO）及京都基因和基因组百科全书（KEGG）信号通路富集分析其可能的功能与信号通路。纳入2014年1月–2017年12月于我院接受胃癌根治术的120例患者，免疫组织化学染色检测PCMT1、Ki67在胃癌组织中的表达；Cox回归、Kaplan-Meier曲线和受试者工作特征（ROC）曲线用于胃癌患者术后5年生存率的预后分析。采用慢病毒构建干扰或过表达PCMT1载体，转染人胃癌细胞系MGC-803与HGC-27细胞，设置干扰空载体（sh-NC）组与干扰PCMT1载体（sh-PCMT1）组，过表达空载体（LV-Vec）组与过表达PCMT1载体（LV-PCMT1）组；Western blot检测各组细胞中PCMT1、CyclinB1、CDC20蛋白表达，CCK-8法检测胃癌细胞增殖能力，流式细胞术检测细胞周期。注射4组MGC-803细胞构建裸鼠皮下移植瘤模型，每组3只，测量体质量，14 d后处死裸鼠，测量肿瘤体积，Western blot法检测肿瘤组织中CyclinB1与CDC20蛋白表达水平。结果 UALCAN数据库分析示PCMT1在胃癌组织中高表达且在不同病理分期、分级与淋巴结转移的胃癌组织中均表达升高（P<0.05）。GO与KEGG富集示PCMT1主要参与有丝分裂、纺锤体组装检查点与细胞周期等信号。免疫组化结果显示PCMT1与Ki67在患者胃癌组织中呈高表达且二者呈正相关关系（P<0.05）。Cox多因素分析示PCMT1高表达[风险比（HR）=2.921,95%置信区间（CI）:1.628～5.239]是影响胃癌患者术后5年生存率的独立危险因素之一。Kaplan-Meier曲线分析示高表达PCMT1的患者术后5年生存率（16.7%,HR=4.651,95%CI=2.846～7.601）低于低表达PCMT1患者（70.0%,HR=0.215,95%CI=0.132～0.351）。ROC曲线表明，PCMT1预测患者术后5年生存率的曲线下面积为0.764(95%CI:0.674～0.854)。Western blot对PCMT1的检测结果表明慢病毒干扰或过表达PCMT1细胞系构建成功。CCK-8结果表明下调PCMT1表达MGC-803与HGC-27细胞增殖能力减弱，过表达PCMT1则促进细胞增殖（P<0.05）。干扰PCMT1后CDC20蛋白表达下调，CyclinB1蛋白表达上升，细胞周期阻滞于G2/M期，而过表达则呈现相反趋势（P<0.05）。sh-PCMT1组裸鼠肿瘤的体积与质量减小，肿瘤组织CDC20蛋白表达降低，CyclinB1蛋白表达升高（P<0.05，与sh-NC组相比），LV-PCMT1组则呈相反趋势（P<0.05，与LV-Vec组相比）。结论 PCMT1在胃癌组织中呈高表达，与患者不良预后相关，可能通过调控细胞有丝分裂进程中纺锤体检查点影响肿瘤细胞恶性增殖。
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单位中心实验室; 蚌埠医学院第一附属医院; 蚌埠医学院
