小鼠原代肝细胞中PTEN基因沉默所需siRNA的筛选

作者：周龙; 王立林; 胡序怀

来源：中国当代医药, 2019, 26(08): 22-28.

DOI：10.3969/j.issn.1674-4721.2019.08.008

• 小鼠原代肝细胞
• PTEN磷酸水解酶
• 小干扰RNA
• 胰岛素抵抗

目的筛选出小鼠原代肝细胞中PTEN基因沉默所需的高效siRNA。方法采用两步胶原酶灌注法分离小鼠原代肝细胞,放入25 cm2胶原包被瓶中(1×106个/瓶),均分为5组:对照组(C组)、阴性对照组(NC组)、siR-996组、siR-1381组、siR-1519组。采用Hi PerFect转染试剂将各组对应的siRNA序列转入小鼠原代肝细胞,24 h后提取RNA和蛋白,通过Real-time PCR检测各组PTEN mRNA表达,通过Western blot检测各组PTEN蛋白含量。结果siR-996组、siR-1381组和siR-1519组的PTEN蛋白含量低于NC组,差异有统计学意义(P<0.01),siR-996组、siR-1381组和siR-1519组的PTEN mRNA水平低于NC组,差异有统计学意义(P<0.01)。siR-996组的PTEN蛋白含量及PTEN mRNA水平最低,其PTEN蛋白含量及PTEN m RNA水平的沉默效率高于siR-1381组和siR-1519组。结论 siR-996是小鼠原代肝细胞中PTEN基因沉默所需的高效siRNA。

• 单位
  深圳市血液中心; 南方医科大学; 深圳市卫生健康发展研究中心; 深圳市妇幼保健院