摘要
目的:构建敲低、过表达人NCOA4基因的慢病毒载体,建立敲低、过表达NCOA4的HFL1稳转株,为研究NCOA4介导的铁死亡在肺部疾病中的作用提供一个细胞模型。方法:设计NCOA4的shRNA并插入pLKO.1载体;获取人NCOA4全基因组序列并插入pCDH载体。DNA测序验证载体目的基因序列。慢病毒包装载体共转染293T细胞,包装病毒并感染HFL1,使用Western Blot、qPCR检测其敲低、过表达效果。结果:本研究成功构建了NCOA4敲低、过表达慢病毒载体。慢病毒感染人HFL1细胞后,得到敲低、过表达NCOA4基因的HFL1稳转株。结论:成功获取了稳定敲低、过表达NCOA4的HFL1的细胞株,为研究NCOA4介导的铁死亡在肺部疾病中的作用和机制奠定了基础。
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单位生命科学学院; 复旦大学