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摘要
目的探讨PTEN通过磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B (AKT)信号通路对非小细胞肺癌(NSCLC)顺铂敏感性的影响。方法选择2016年1月至2018年1月于郑州大学附属肿瘤医院手术切除的60例NSCLC患者的癌组织标本及对应的癌旁组织(距肿瘤边缘> 5 cm)标本,采用免疫组织化学染色检测癌组织和癌旁组织中PTEN蛋白表达。培养NSCLC细胞株A549,取对数生长期细胞并随机分为blank组(不作任何处理)、pcDNAPTEN组(转染PTEN过表达质粒)、pcDNA-PTEN对照组(转染PTEN过表达对照质粒)、siRNA-PTEN组(转染siRNAPTEN质粒)、siRNA-PTEN对照组(转染siRNA-PTEN对照质粒)、wortmannin组(转染PI3K/AKT信号通路抑制剂)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)组(转染PI3K/AKT信号通路激动剂)、pcDNA-PTEN+IGF-1组(共转染pcDNA-PTEN过表达质粒和PI3K/AKT信号通路激动剂),采用Lipofectamine 2000介导细胞转染,转染6 h后更换为完全培养基,37℃培养48 h后收集细胞;采用定量反转录聚合酶链反应检测A549细胞中PTEN、PI3K及AKT mRNA表达,Western blot法检测A549细胞中PTEN、PI3K及AKT蛋白表达,Transwell实验检测A549细胞侵袭能力,划痕实验检测A549细胞迁移能力。取各组转染后培养48 h细胞,分别加入0.00、0.75、1.50、3.00、6.00、12.00μmol·L-1顺铂,培养48 h后应用细胞计数试剂盒-8检测A549细胞对顺铂的敏感性。结果 NSCLC患者癌组织中PTEN蛋白阳性表达率显著低于癌旁组织,癌组织中PI3K、AKT蛋白阳性表达率显著高于癌旁组织(P <0.05)。blank组、pcDNA-PTEN对照组和siRNAPTEN对照组A549细胞中PTEN、PI3K、AKT蛋白及mRNA表达比较差异无统计学意义(P> 0.05);与pcDNA-PTEN对照组比较,pcDNA-PTEN组A549细胞中PTEN蛋白及mRNA表达增加,PI3K、AKT蛋白及mRNA表达减少(P <0.05);与siRNA-PTEN对照组比较,siRNA-PTEN组A549细胞中PTEN蛋白及mRNA表达减少,PI3K、AKT蛋白及mRNA表达增加(P <0.05);与pcDNA-PTEN组比较,pcDNA-PTEN+IGF-1组A549细胞中PTEN蛋白及mRNA表达减少,PI3K、AKT蛋白及mRNA表达增加(P <0.05);与blank组比较,wortmannin组A549细胞中PTEN蛋白和mRNA表达增加,PI3K、AKT蛋白及mRNA表达减少(P <0.05);与blank组和wortmannin组比较,IGF-1组A549细胞中PTEN蛋白和mRNA表达减少,PI3K、AKT蛋白及mRNA表达增加(P <0.05)。blank组、pcDNA-PTEN对照组和siRNA-PTEN对照组A549细胞侵袭和迁移能力比较差异无统计学意义(P> 0.05); pcDNA-PTEN组A549细胞侵袭和迁移能力显著低于pcDNA-PTEN对照组(P <0.05),siRNA-PTEN组A549细胞侵袭和迁移能力显著高于siRNA-PTEN对照组(P <0.05),IGF-1组A549细胞侵袭和迁移能力显著高于blank组和wortmannin组(P <0.05),wortmannin组A549细胞侵袭和迁移能力显著低于blank组(P <0.05),pcDNA-PTEN+IGF-1组A549细胞侵袭和迁移能力显著高于pcDNA-PTEN组(P <0.05)。随着顺铂浓度增加,各组A549细胞存活率逐渐降低(P <0.05)。各浓度顺铂干预下,blank组、pcDNA-PTEN对照组和siRNA-PTEN对照组A549细胞存活率比较差异无统计学意义(P> 0.05),pc DNAPTEN组A549细胞存活率显著低于pcDNA-PTEN对照组(P <0.05),siRNA-PTEN组A549细胞存活率显著高于siRNA-PTEN对照组(P <0.05),wortmannin组A549细胞存活率显著低于blank组(P <0.05),IGF-1组A549细胞存活率显著高于wortmannin组和blank组(P <0.05),pcDNA-PTEN+IGF-1组A549细胞存活率显著高于pcDNA-PTEN组(P <0.05)。结论 NSCLC组织中PTEN蛋白表达降低,上调PTEN基因表达可能通过抑制PI3K/AKT信号通路活性而降低细胞侵袭和迁移能力,提高NSCLC细胞对顺铂的敏感性。
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