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摘要
目的 探讨mi RNA-544-3p对乙型肝炎病毒X蛋白（HBx）诱导的肝细胞癌的影响及分子机制。方法 培养含增强型绿色荧光蛋白（EGFP）和HBx的慢病毒稳转小鼠永生化肝前体细胞株14-19(HBx-EGFP-14-19细胞)，并通过向昆明小鼠肝门静脉注射上述细胞构建可长期稳定表达HBx的模型，采用q PCR检测mi RNA-544-3p在HBxEGFP-14-19细胞及小鼠模型肝组织中的表达。在HBx-EGFP-14-19细胞中瞬时转染mi RNA-544-3p模拟物（mimic）或抑制剂（inhibitor），应用划痕愈合实验、Transwell细胞迁移和侵袭实验检测mi RNA-544-3p对HBx-EGFP-14-19细胞迁移和侵袭的影响，采用q PCR和蛋白质印迹法探究mi RNA-544-3p对二磷酸腺苷核糖基化因子6(Arf6)、Akt、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（m TOR）表达的调控作用。结果 成功构建了可长期稳定表达HBx的小鼠模型，该小鼠在造模后360 d处死时可见肝组织有恶性肿瘤生成。与对照组相比，HBx-EGFP-14-19细胞和HBx模型小鼠各时间点（造模后30、90、180、360 d）肝组织中mi RNA-544-3p表达水平均降低（P均<0.05）。与对照组比较，转染mi RNA-544-3p mimic的HBx-EGFP-14-19细胞迁移和侵袭能力均降低，转染mi RNA-544-3p inhibitor的HBxEGFP-14-19细胞迁移和侵袭能力均增强（P均<0.05）。q PCR和蛋白质印迹法检测结果显示mi RNA-544-3p低表达与Arf6表达水平上调、Akt-m TOR信号轴的激活有关。结论 HBx可能通过下调mi RNA-544-3p激活Arf6/AktmTOR信号轴促进小鼠肝癌细胞的侵袭和迁移能力。
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