MiR-148b-3p/FOXO4轴对乳腺癌细胞自噬及生长的影响

作者：郭玲; 陈敬信^*

来源：临床与病理杂志, 2023, 43(09): 1621-1630.

• miR-148b-3p
• 叉头框蛋白O4
• 乳腺癌
• 增殖
• 凋亡
• 自噬

目的：MiR-148b-3p通过调节叉头框蛋白O4(forkhead box O4,FOXO4)在乳腺癌(breast cancer,BC)进展中的作用还未完全阐明。本研究探究miR-148b-3p调节FOXO4表达对BC细胞增殖、凋亡和自噬的影响。方法：采用实时反转录聚合酶链反应(real-time reverse transcription polymerase chain reaction,real-time RT-PCR)检测BC患者的癌组织标本(BC组织)和邻近的非肿瘤组织标本(正常组织)、人正常乳腺上皮细胞MCF-10A和人BC细胞(MCF7、SKBR3、MDA-MB-231细胞)中miR-148b-3p和FOXO4的表达情况。对MDA-MB-231细胞进行转染并将其分为对照组(Ctrl组)、inhibitor-NC组、miR-148b-3p inhibitor组、si-NC组、si-FOXO4组、miR-148b-3p inhibitor+si-NC组、mi R-148b-3p inhibitor+si-FOXO4组。采用细胞计数试剂盒8(cell counting kit 8,CCK-8)法检测细胞增殖；流式细胞术检测细胞凋亡；透射电镜观察细胞自噬；蛋白质印迹法检测细胞FOXO4、增殖、凋亡和自噬相关蛋白表达；双荧光素酶报告基因检测(double luciferase reporter gene assay,DLR)和miRNA下拉实验验证miR-148b-3p与FOXO4的靶向作用关系。结果：与正常组织比较，BC组织中miR-148b-3p表达升高，FOXO4 mRNA表达降低(P<0.05);Pearson相关性分析结果显示BC患者癌组织中miR-148b-3p的表达水平与FOXO4 mRNA的水平呈负相关(r=-0.774,P<0.01)。与MCF-10A细胞比较，MCF-7细胞、SKBR3细胞和MDA-MB-231细胞中miR-148b-3p表达均升高，FOXO4蛋白和mRNA表达均降低(均P<0.05)，且MDA-MB-231细胞中升高或降低更多。miR-148b-3p靶向负调控FOXO4的表达。敲减miR-148b-3p后MDA-MB-231细胞活力、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)蛋白水平降低，凋亡率、自噬小体数量、FOXO4蛋白和m RNA水平、cleaved-caspase-3、cleaved-PARP-1、LC3-II/LC3-I、Beclin-1蛋白水平均升高(均P<0.05)，而敲减FOXO4后与之相反；敲减FOXO4可减弱敲减miR-148b-3p对MDA-MB-231细胞增殖、凋亡和自噬的影响。结论：miR-148b-3p可能通过靶向FOXO4促进MDA-MB-231细胞增殖，抑制其凋亡和自噬。

• 单位
  咸阳市第一人民医院