SB431542对人羊膜上皮细胞上皮间质转化的影响

作者：王静; 戴成祥; 李萍^*; 沈美萍; 李苏克; 刘必佐

来源：中国医药生物技术, 2020, 15(02): 163-170.

• 人羊膜上皮细胞
• TGF-β
• SB431542
• 上皮间质转化
• 干细胞

目的探讨通过添加TGF-β抑制剂SB431542控制人羊膜上皮细胞的干性、表型和间质特性,为SB431542在预防人羊膜上皮细胞上皮间质转化(EMT)中的作用提供依据。方法使用不同浓度SB431542培养P2代人羊膜上皮细胞,通过细胞的增殖曲线和基因水平(CK8、ACTA2、OCT4和KLF4)表达的差异,筛选出最适浓度。以不加SB431542的细胞为对照组,以加最适浓度的SB431542为实验组,比较不同代次的对照组和实验组的细胞倍增时间,基因表达水平(CK8、CK19、OCT4、KLF4、Vimentin、ACTA2),流式检测细胞表面标志物(CD146、CD105、SSEA4)和免疫荧光检测细胞蛋白表达情况(CK8、ACTA2、EpCAM)的差异。结果使用不同浓度SB431542培养P2代人羊膜上皮细胞,5μmol/L SB431542培养条件下的细胞增殖曲线最优,且基因水平(CK8、ACTA2、OCT4和KLF4)表达最优,最终筛选最适药物浓度为5μmol/LSB431542完成后续实验。在5μmol/L SB431542培养条件下,P7代实验组的细胞倍增时间优于对照组;P7代实验组细胞的CK8、CK19、KLF4、OCT4的表达水平明显高于对照组细胞的表达水平,实验组的ACTA2(α-SMA)和Vimentin表达水平明显低于对照组细胞的表达水平;P3和P5代细胞的实验组的间充质标志物CD146、CD105的表达量均比对照组的低,实验组干细胞标志物SSEA4的表达量均比对照组的高;P7代实验组的CK8和EpCAM表达效果强于P7代对照组细胞,且P7代实验组的α-SMA基本不表达。结论 5μmol/LSB431542在人羊膜上皮细胞体外培养7个代次以内可以有效地抑制其上皮间质转化的发生。