百草枯对A549细胞中解整合素-金属蛋白酶17表达的影响

作者：方文燕; 林昌伟; 王宝福; 冯胜刚

来源：中华劳动卫生职业病杂志, 2018, 36(01): 12-17.

• 百草枯
• 肺纤维化
• A549细胞
• ADAM17

目的构建体外百草枯(paraquat,PQ)细胞纤维化模型,观察PQ对A549细胞中解整合素-金属蛋白酶17(ADAM17)表达的影响,探讨ADAM17在PQ中毒致肺纤维化中的作用。方法体外培养A549细胞,分为正常对照组、不同浓度PQ组,应用CCK-8检测细胞活力,筛选PQ浓度和时间,显微镜下观察细胞形态,ELISA测定各组纤维化标志物Ⅰ型胶原(typeⅠcollagen,ColⅠ)和纤连蛋白(fibronectin,FN)的表达,建立细胞纤维化模型;免疫细胞化学检测A549细胞中ADAM17的分布情况,RT-PCR和Western blot分别半定量检测ADAM17 mRNA及蛋白水平的表达情况。结果 (1)随着PQ浓度增加及作用时间延长,A549细胞活力呈下降趋势,差异有统计学意义(P<0.05),呈剂量依赖性和时间依赖性。(2)正常的A549细胞融合呈铺路石样生长,排列比较紧密,经PQ诱导后细胞排列较松散,细胞间连接变疏松,部分细胞溶解、死亡。(3)ELISA显示,随PQ浓度增加,ColⅠ和FN表达增强,差异有统计学意义(P<0.05);随PQ时间延长,ColⅠ和FN表达也逐渐增强,差异有统计学意义(P<0.05),成功建立PQ细胞纤维化模型。(4)免疫细胞化学显示,ADAM17在A549细胞胞浆表达。(5)RT-PCR和Western blot表明,随着PQ浓度增加,ADAM17 mRNA及蛋白水平表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.05),以PQ200umol/L时最为明显。随着PQ作用时间延长,ADAM17mRNA及蛋白表达水平也明显增加,差异有统计学意义(P<0.05),在24h达到高峰。结论百草枯可引起肺泡上皮细胞形态学改变,导致细胞损伤,成功建立细胞的纤维化模型,对A549细胞的毒性作用具有剂量和时间依赖性。ADAM17在PQ诱导的A549细胞中过表达,可能参与了百草枯诱导的肺纤维化过程。

• 单位
  西南医科大学; 南充市中心医院