摘要
研究广叶绣球菌多糖(polysaccharides,SLPs)对小鼠CD8+T细胞活化、增殖分化以及效应阶段的影响,探索广叶绣球菌多糖对CD8+T细胞的免疫应答调控机制。通过腹腔注射环磷酰胺溶液(80mg/kg)构建免疫低下小鼠模型,灌胃广叶绣球菌多糖(低、中和高剂量分别为100、200和400 mg/kg),连续饲养20 d后处死,取脾脏和胸腺。血细胞分析仪测定血常规;MTT检测脾T淋巴细胞的扩增能力;流式细胞术分析脾脏CD8+T细胞表面CD28、CTLA-4和PD1以及树突状细胞表面MHCⅠ、CD80和PD-L1的表达量;ELISA测定外周血中TNF-α、IFN-γ、IL-2、IL-10、穿孔素及颗粒酶B的含量;RT-PCR测定脾脏Psmb9、Psmd9、TAP1、TAP2、IFN-γ、IL-2、JAK1、JAK2、STAT1、STAT3、SOCS-3和Blimp-1的mRNA表达量;Westernblot测定pJAK2/JAK2、pSTAT3/STAT3和Blimp-1的蛋白表达量。试验表明广叶绣球菌多糖高剂量组脾脏指数显著升高,外周血中红细胞、白细胞、淋巴细胞、单核细胞和血小板的含量显著升高(P<0.05或P<0.01);多糖中、高剂量组脾T淋巴细胞的扩增能力显著增强(P<0.05);中、高剂量组CD8+T细胞含量显著降低,CD8+T细胞表面PD-1分子含量显著降低,树突状细胞表面PD-L1分子含量显著降低、MHCⅠ细胞含量显著升高(P<0.05或P<0.01);多糖高剂量组TNF-α、IFN-γ、IL-2、穿孔素和颗粒酶B的含量显著升高(P<0.05或P<0.01),IL-10的含量显著降低(P<0.05);中、高剂量组Psmb9、Pmsd9、TAP1、TAP2和Blimp-1的mRNA含量显著升高(P<0.05或P<0.01),JAK1、JAK2、STAT1和STAT3的mRNA和蛋白表达量显著降低(P<0.05或P<0.01)。多糖中高剂量组Blimp-1蛋白表达量显著升高(P<0.05),多糖组与阳性对照组趋势一致。因此,认为广叶绣球菌多糖能够调节MHCⅠ类抗原加工呈递分子,并通过JAK2/STAT3信号通路促进CD8+T细胞的活化、增殖分化和效应杀伤过程,从而调控CD8+T细胞的免疫应答,起到改善小鼠免疫低下的作用。
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