蛋白激发子Hrip1互作蛋白的筛选及其原核表达

作者：李书鹏; 杨秀芬; 袁京京; 邱德文

来源：生物技术通报, 2017, 33(06): 182-189.

DOI：10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.20170001

• 蛋白激发子
• 互作蛋白
• 酵母双杂交
• 原核表达

蛋白激发子Hrip1是从极细链格孢菌(Alternaria tenuissima)中分离纯化出的一种新型超敏反应诱导蛋白,能激发烟草、拟南芥和水稻等多种植物的免疫防御反应,提高广谱抗病性。为了探究Hrip1诱导植物抗性反应的分子机制,以Hrip1为诱饵蛋白,通过酵母双杂交,在水稻c DNA文库中筛选Hrip1的互作蛋白。经回转验证和x-a-gal染色得到了一个Hrip1互作蛋白-CSN5。构建了互作蛋白CSN5的原核表达载体pGEX-6P-2-CSN5,并转化大肠杆菌表达菌株BL21。经IPTG诱导后获得了可溶性的融合表达蛋白,用GST亲和层析柱纯化获得单一条带的融合表达蛋白,并用Western blot鉴定了融合表达蛋白的正确性。研究结果为进一步鉴定Hrip1的互作蛋白及其功能奠定了基础。

• 单位
  中国农业科学院植物保护研究所; 植物病虫害生物学国家重点实验室