凝血因子Ⅶ高表达细胞的高通量筛选方法

作者：彭林; 李成媛; 熊文典; 蔡燕飞; 金坚; 李华钟^*

来源：食品与生物技术学报, 2018, 37(07): 722-726.

• 高通量
• 中国仓鼠卵巢细胞
• 流式细胞仪
• 重组蛋白

针对哺乳动物细胞表达克隆的耗时较长的筛选过程,作者通过流式细胞仪对细胞进行快速筛选和纯度检测。利用流式细胞仪对电转细胞进行分选,利用点杂交和western blot方法筛选高表达克隆。流式细胞仪分选后的细胞,经点杂交和WB检测后获得的CHO-r FVII-1细胞,表达r FVII细胞的比例为99.9%,同时与传统筛选方法获得的CHO-r FVII克隆比较后发现,两株细胞具有相同的r FVII产量。作者基于流式细胞仪建立了快速筛选高表达重组药物蛋白克隆的筛选的高通量方法和纯度检测的方法,为其他在哺乳动物细胞中表达重组蛋白的筛选提供参考。

• 单位
  工业生物技术教育部重点实验室; 江南大学; 生物工程学院