长链非编码RNA CYTOR靶向调控miR-206对结肠癌细胞生物学行为的影响

作者：周兵; 林爱珍^*

来源：山东医药, 2019, 59(31): 37-41.

• 结肠癌
• 长链非编码RNA CYTOR
• 微小RNA-206
• 细胞增殖
• 细胞侵袭
• 细胞迁移

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)CYTOR靶向调控微小RNA-206(miR-206)对结肠癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法选择结肠癌患者30例,收集结肠癌组织及其配对的癌旁正常组织,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测CYTOR、miR-206表达,并分析结肠癌组织中CYTOR表达与miR-206表达的关系。取传2代、对数生长期、生长状态良好的结肠癌LoVo细胞,随机分为CYTOR组与对照1组、miR-206组与对照2组,分别转染CYTOR shRNA与阴性对照shRNA、miR-206 mimics与阴性对照miRNA,采用RT-qPCR法验证转染效率。收集各组转染后细胞,采用CCK-8法检测细胞增殖能力,采用Transwell小室实验检测细胞侵袭和迁移能力。通过StarBase数据库(http://starbase.sysu.edu.cn/index.php)确定CYTOR和miR-206的结合位点。将人胚肾上皮HEK-293T细胞接种于12孔板中,随机分为pMIR-CYTOR-wt+miR-206 mimics组、pMIR-CYTOR-wt+阴性对照miRNA组、pMIR-CYTOR-mut+miR-206 mimics组、pMIR-CYTOR-mut+阴性对照miRNA组,相应转染pMIR-CYTOR-wt、pMIR-CYTOR-mut、miR-206 mimics、阴性对照miRNA,采用双荧光素酶报告基因实验检测各组转染后荧光素酶活性。结果结肠癌组织CYTOR相对表达量明显高于癌旁正常组织,miR-206相对表达量明显低于癌旁正常组织(P均<0.01)。Pearson相关分析显示,结肠癌组织CYTOR相对表达量与miR-206相对表达量呈负相关关系(r=-0.599,P<0.01)。CYTOR组CYTOR相对表达量明显低于对照1组,miR-206组miR-206相对表达量明显高于对照2组(P均<0.05)。CYTOR组细胞增殖、侵袭和迁移能力均明显低于对照1组(P均<0.05);miR-206组细胞增殖、侵袭和迁移能力均明显低于对照2组(P均<0.05)。通过搜索CYTOR潜在的目标基因发现,CYTOR包含miR-206的保守目标位点。双荧光素酶报告基因实验显示,pMIR-CYTOR-wt+miR-206 mimics组荧光素酶活性明显低于pMIR-CYTOR-wt+阴性对照miRNA组、pMIR-CYTOR-mut+miR-206 mimics组、pMIR-CYTOR-mut+阴性对照miRNA组,而pMIR-CYTOR-wt+阴性对照miRNA组、pMIR-CYTOR-mut+miR-206 mimics组、pMIR-CYTOR-mut+阴性对照miRNA组两两比较P均>0.05。结论 CYTOR通过靶向抑制miR-206表达促进结肠癌细胞增殖、侵袭和迁移。

• 单位
  湖北省中医院